大豆UDP-糖基转移酶基因GmA02G03420的克隆与抗旱性分析

发布时间：2020-05-08 17:50

【摘要】：大豆是我国重要的粮油作物,是优质植物蛋白和植物油的重要来源。它在国民经济发展中具有特殊的战略地位。我国是大豆的原产地,大豆栽培历史悠久,是目前世界四大大豆生产国之一。近年来,随着我国人民生活水平的提高,对大豆的需求急剧增加。大豆产量常受极端天气影响,其中干旱最容易造成大豆年产量的下降,如何克服干旱对大豆产量的影响成为当前育种研究的一项主要工作。本实验根据前期转录组测序结果,利用抗旱突变体M18克隆获得的UDP-糖基转移酶基因,以植物表达载体pCAMBIA3301(p3301)为基础载体构建了过表达载体和RNA干扰表达载体。通过农杆菌介导法,将构建完成的重组载体转入到大豆受体品种‘吉农18’(JN18)中。将经过PCR初步检测的阳性转基因植株种子在人工气候室内进行加代,并对T_2代转基因植株在外源基因的整合水平上进行Southern blotting检测,转录水平上的荧光定量PCR检测以及室内抗旱的初步鉴定,以期为转基因大豆抗旱性的研究提供有效材料。主要研究结果如下:1、克隆得到目标基因,并利用无缝克隆技术构建了过表达载体p3301-GmA02G03420和RNA干扰表达载体p3301-GmA02G03420-RNAi。2、利用农杆菌介导法转化大豆受体品种JN18。经PCR检测,得到T_0代转p3301-GmA02G03420载体和p3301-GmA02G03420-RNAi载体的阳性植株分别有4株、2株。3、经加代得到T_1代转p3301-GmA02G03420载体阳性植株5株,转p3301-GmA02G03420-RNAi载体阳性植株4株。在人工气候室加代后经PCR初步检测得到T_2代转p3301-GmA02G03420载体阳性植株12株,转p3301-GmA02G03420-RNAi载体阳性植株10株。4、T_2代转基因植株Southern blotting检测结果表明,目标基因以单拷贝的形式整合到大豆受体基因组中,杂交信号强度不同。5、荧光定量PCR结果表明转过表达载体植株与对照相比表达量显著提高,转干扰表达载体与对照相比表达量显著降低。6、抗旱性鉴定结果表明,转过表达载体植株显著提高了JN18的抗旱能力。
【图文】：

图 2.1 克隆载体的验证Fig.2.1 Verification of cloning vectors图 2.2 GmA02G03420 测序结果Fig.2.2 Sequencing results of GmA02G03420网站进行基因序列比对，并用 MEGA 软件作图。结果表酶 UGT74B1 基因（XM_003519384.4）同源性达到 10基转移酶基因相似，以此方向进行后续实验中基因功能

图 2.2 GmA02G03420 测序结果Fig.2.2 Sequencing results of GmA02G03420CBI 网站进行基因序列比对，，并用 MEGA 软件作图。结果表明该基基转移酶 UGT74B1 基因（XM_003519384.4）同源性达到 100％。推与糖基转移酶基因相似，以此方向进行后续实验中基因功能的验证
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S565.1

【参考文献】

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本文编号：2654985