小金蝠蛾细胞免疫及其与冬虫夏草菌的免疫互作初步研究

发布时间：2020-06-27 14:31

【摘要】：本研究旨在鉴定小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis血细胞类型,统计各类血细胞百分含量并检测其细胞免疫能力。探究冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis是如何耐受小金蝠蛾细胞免疫的。利用光学相差显微镜观察小金蝠蛾7龄幼虫血细胞,并根据鳞翅目昆虫血细胞特有形态对小金蝠蛾血细胞进行鉴定,利用96孔板对小金蝠蛾各类血细胞进行计数并计算各类血细胞的百分含量。利用酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae以及Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激小金蝠蛾,检验其细胞免疫反应。利用扫描电子显微镜分别对感染7 d冬虫夏草菌的小金蝠蛾血细胞(HTO)以及健康的小金蝠蛾血细胞(HT)进行观察。对上述两种处理的小金蝠蛾血细胞进行GFP标记的鬼笔环肽荧光染色,并利用激光共聚焦免疫荧光显微镜进行观察。进一步利用Q-PCR对F-actins合成相关基因转录水平进行检测。小金蝠蛾7龄幼虫血细胞由粒细胞、浆细胞、珠血细胞和类绛色细胞组成,百分含量分别为62.5%,26.6%,10.1%和0.8%,未发现典型的原血细胞。酿酒酵母刺激结果显示,小金蝠蛾血细胞可以发生吞噬以及结节反应。Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激结果显示,小金蝠蛾血细胞可以发生包囊反应。通过扫描电子显微镜的观察可以发现,健康小金蝠蛾血细胞表面具有密集的丝状伪足,而感染冬虫夏草菌7 d的小金蝠蛾血细胞,其细胞表面丝状伪足显著减少。感染冬虫夏草菌7 d的小金蝠蛾血细胞中微丝束不明显,绿色荧光信号成弥散状,与健康小金蝠蛾血细胞中较为清晰的微丝束有明显差异。Q-PCR检测结果显示,感染冬虫夏草菌7 d的小金蝠蛾血细胞DRF的表达量显著降低;Thymosin的表达量显著升高;Profilin的表达量显著升高。小金蝠蛾血细胞组成及其形态与其他鳞翅目昆虫一致,其中粒细胞的百分含量最高。小金蝠蛾血细胞对酿酒酵母刺激敏感,可发生吞噬和结节反应,对Congo Red染色的DEAE-Sephadex A-25凝胶珠刺激敏感,可发生包囊反应。小金蝠蛾细胞免疫功能完善。冬虫夏草菌可以通过对小金蝠蛾幼虫血细胞丝状伪足的形成产生不利影响,进而降低小金蝠蛾幼虫细胞免疫能力。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S567.35
【图文】：

鳞翅目昆虫,血细胞,类型

鳞翅目昆虫血细胞类型[1]

蝠蛾幼虫,小金,血细胞,蝠蛾

10图 1 小金蝠蛾幼虫血细胞形态Fig. 1 Morphology of hemocytes of Thitarodes xiaojinensis larvae：小金蝠蛾血细胞孔板孵育初期，可见粒细胞(GR)、浆细胞(PL)、类绛色细细胞(Sph)。不同种类血细胞已用黑色箭头标出，标尺= 40 μm。Initial incof hemocytes of T. xiaojinensis in well plates, granulocytes(GR), plasmatocytytoids(OE), and spherule cells(Sph) can be observed. Different types of hemocd out by black arrows, Scale bar = 40 μm. B：粒细胞 Granulocytes；C：atocytes; D：类绛色细胞 Oenocytoids; E:珠血细胞 Spherule cells. 标ale bar = 20 μm. 小金蝠蛾各类血细胞百分含量统计结果金蝠蛾 7 龄幼虫各类血细胞在总血细胞中占比分别为粒细胞 62.5% ±5. 26.6% ±3.39%，珠血细胞为 10.1% ±2.56%，类绛色细胞为 0.8% ±0.7

【参考文献】