东乡野生稻内生真菌L99和S108次级代谢产物研究

发布时间：2020-07-02 22:05

【摘要】：东乡野生稻(Oryza rufipogon Griff.)是1978年在江西省东乡县所发现的目前世界上纬度最高的野生稻,具有抗寒、耐旱、耐瘠、抗虫、免疫矮缩病等优良抗逆品质。本论文以实验室前期所获得的东乡野生稻内生真菌L99和S108为研究对象,对其进行形态学和分子生物学分类鉴定,最终将菌株L99鉴定为Sarocladium oryzae,S108菌株鉴定为Chaetomium globosum。随后采用固态发酵的培养方式,获得乙酸乙酯浸提物,再利用硅胶柱层析、葡萄糖凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、薄层色谱分析(TLC)以及高效液相色谱分析等分离手段,追踪分离获得化合物。结合高分辨质谱和核磁共振谱等现代色谱技术对分离纯化得到的化合物进行结构解析与鉴定,最后评价这些化合物对黑色素瘤B16细胞活力的影响,得到以下结论:从菌株L99乙酸乙酯粗提物中分离纯化得到10个化合物,鉴定其分别为:脱氧胸腺嘧啶核苷(1)、2'-O-甲基腺苷(2)、2'-脱氧尿苷(3)、脲嘧啶核苷(4)、腺嘌呤核苷(5)、(E)-9-methyloctadec-9-enoic acid(6)、麦角甾醇过氧化物(7)、烟曲霉酸(8)、(9Z)-glycerin-1-monooleate(9)、酞酸二丁酯(10)。从菌株S108乙酸乙酯粗提物中分离纯化得到7个化合物,鉴定其分别为:邻苯二甲酸二辛酯(11)、6-Hydroxymellein(12)、Chaetomugilin D(13)、Chaetomugilin S(14)、Chaetoviridins A(15)、球毛壳素A(16)、6-O-demethyl-5-deoxyfusarubin(17)。在黑色素瘤B16细胞生存活力的试验中,发现化合物酞酸二丁酯(10)和6-Hydroxymellein(12)对黑色素瘤B16细胞活力影响较大,并在10μM时对黑色素瘤B16细胞的杀伤能力最强。
【学位授予单位】：江西科技师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S511.9
【图文】：

化学结构,化合物,宿主植物

12图 1-2 化合物 6~90 的化学结构Fig.1-2 The chemical structures of compounds 6~901.3 论文设计思路1.3.1 选题背景植物内生真菌(Endophytic fungi)是在寄主植物体内度过全部或近乎全部生活周期而不使寄主表现出任何症状的一类真菌，它们普遍存在于健康植物组织中，种类繁多，能够产生丰富多样的具有生物活性的次级代谢产物[51-52]。目前世界上鉴定的约有 150 万种真菌[53]，其中约有 130 万种是内生真菌[54]。内生真菌具有很大的存在数量，且种类和次代谢产物具有多样性。作为一类长期存在于宿主植物体内的微生物，与宿主植物协同进化，形成了一种互利共生的关系，既可以产生与宿主植物相类似甚至相同的化合物又蕴含丰富的天然化合物。近年来

内生真菌,菌落形态

TS rDNA 序列在 NCBI 的 GenBank 序列库中进行 BLAST 比对，申 Ge号。下载相关序列的 ITS rDNA 序列，使用 MEGA6.0 软件 Clustal X 方实验结果1 内生真菌 L99 和 S108 的形态观察结果内生真菌 L99 在 PDA 平板上菌落形态如图 2-1 中 A 和 A’所示：采用点在 PDA 平板上，菌落为白色丝绒状，中间明显凸起，无皱褶，无渗出后期菌落表面由白色变成粉红色，背面有粉红色色素渗出。内生真菌 S108 在 PDA 平板上菌落形态如图 2-1 中 B 和 B’所示，菌落，颜色由最初的白色逐渐变为黑灰色且无渗出液。菌落的背面为黑色菌丝在培养基内部生长。

【参考文献】