辽宁省栽培龙胆质量及种子幼苗逆境胁迫适应性研究

发布时间：2020-10-30 10:54

　　 目的:本实验以辽宁省不同栽培产地中药龙胆草及其种子、幼苗为研究对象,对龙胆草质量及种子幼苗逆境胁迫适应性进行研究,以期为建立龙胆药材的质量评价及更为规范化的龙胆种植提供依据。材料与方法:1材料:本课题实验材料采集于辽宁省3个不同栽培产地及各产地不同基地的龙胆草共14批(辽宁省抚顺市清原县,抚顺市新宾县,本溪市桓仁县),药用部位为其根及根茎。经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定为粗糙龙胆Gentiana scabra Bunge;龙胆草种子和两年生幼苗采集于抚顺市清原县英额门镇英额门村,品种皆为粗糙龙胆Gentiana scabra Bunge。实验用土壤样品采集于与14批药材对应的栽培基地。2方法:2.1采用培养皿纸上发芽法,利用不同浓度PEG6000、分析纯NaCl人工营造水分胁迫和盐分胁迫环境,在此基础上测定种子发芽率,发芽势,发芽指数等指标,采用SPSS 20.0统计软件对测定结果进行显著性差异检验,比较胁迫环境下种子萌发指标与正常生长环境的差异。2.2通过查阅文献,筛选出6种可以缓解干旱胁迫伤害的外源物质,分别为CaCl_2,水杨酸,壳聚糖,SNP,亚精胺,甜菜碱。采用培养皿纸上发芽法,利用PEG6000人工营造干旱胁迫环境,外源添加不同浓度的6种外源物质,采用显著性差异检验法(LSD法)分析结果。2.3组培室内培养两年生龙胆幼苗5周,期间正常灌水,后采用盆栽控水法进行干旱胁迫处理,将不同浓度壳聚糖溶液注射于胁迫处理组的幼苗根部,期间测定叶片叶绿素含量;培养6周后采集幼苗根及根茎,烘干粉碎后采用高效液相色谱法测定其裂环环烯醚萜苷类含量。2.4采用高效液相色谱法测定不同栽培产地龙胆草药材中裂环环烯醚萜苷类,即龙胆苦苷,獐牙菜苦苷,獐牙菜苷,苦龙胆酯苷的含量,测定对应产地土壤中重金属及农残含量,计算采样后药材折干率,综合评价龙胆药材质量。结果:1.试验相关分析表明龙胆种子的发芽率与NaCl浓度之间呈现显著的负相关,种子发芽势,发芽指数,幼苗长度,活力指数均随着NaCl的增大呈现显著下降趋势,龙胆种子在萌发期间盐胁迫的适宜值为13.15 mmol/L,临界值为71.06mmol/L,极限值为128.97 mmol/L;当PEG浓度为5%时,龙胆种子的发芽率,发芽势,发芽指数均较对照组有小幅度的上升,10%浓度组的发芽率,根茎比,幼苗长度与对照组比无显著性差异,15%-20%浓度组发芽率,根茎比与对照组比有极显著性差异(P0.01)。2.15%PEG干旱胁迫显著抑制种子萌发,6种外源物质皆可在一定程度上缓解干旱胁迫带来的伤害。其中以甜菜碱625mg/L,壳聚糖25mg/L,SNP 0.7mmol/L,水杨酸10mg/L,氯化钙5 mmol/L,亚精胺0.01mmol/L浓度为最佳。3.干旱胁迫环境下龙胆幼苗内指标性成分龙胆苦苷含量较正常水分对照组高,叶片叶绿素含量低于正常水分对照组;壳聚糖4组浓度处理组龙胆苦苷含量皆比正常水分对照组高,叶绿素含量低于正常水分对照组,高于干旱胁迫对照组。其中150 mg/L的壳聚糖浓度处理组龙胆苦苷含量基本与干旱对照组持平,为3.91%,故壳聚糖溶液以150 mg/L为最佳浓度。4.含量测定结果表明龙胆苦苷含量整体趋势为桓仁县新宾县清原县,但结果经SPSS 20.0统计分析显示无显著性差异(P0.05)。清原县各栽培基地之间龙胆苦苷含量除基地5和基地8外整体差异不明显,基地5,基地8含量较高。5.农残及重金属含量测定结果显示3个辽宁栽培产地铜、铅、汞、砷4种重金属含量均符合国家重金属限量标准,清原县4、5、6、8栽培基地药材中未检测出汞元素,所有栽培产地土壤中均未检测出镉元素,而所有基地药材均检测出Cd元素,新宾县及清原县2-2基地药材中检测出2-苯基苯酚,其含量超过欧盟标准(No 396/2005第12章)。6.清原县湾甸子镇大冰沟栽培基地药材的折干率最高,为41.22%,英额门镇英额门村栽培基地药材折干率平均为40.51%,桓仁县五里甸村药材折干率为38.03%,北甸子乡药材折干率39.67%,新宾县药材折干率40.95%。结论:1.龙胆种子体积较小,正常情况下保存期限只有一年左右。本课题首次研究了粗糙龙胆种子在水分胁迫和盐分胁迫环境下的萌发规律,结果证明龙胆种子在适度的干旱胁迫下其各萌发指标呈上升趋势,说明适度干旱胁迫反而可以促进种子萌发;盐分胁迫采用了分析纯氯化钠人工营造盐分胁迫环境,结果显示龙胆种子的发芽率与NaCl浓度之间呈现显著的负相关,各萌发指标均随着氯化钠浓度的提高显著下降,说明龙种子适度耐旱而极其不耐盐,应严格预防栽培产地的土壤盐渍化,合理灌溉,合理施肥,确保龙胆栽培产业的健康可持续发展。2.有研究发现某些外源物质可以缓解逆境胁迫给植物带来的伤害。通过查阅文献,筛选出6种外源物质,壳聚糖,水杨酸,亚精胺,甜菜碱,氯化钙,硝普钠,在干旱胁迫环境下研究其对种子萌发的影响,结果证明6种外源物质均可在一定程度上提高干旱逆境胁迫下种子的发芽率及其它萌发指标,证实了其缓解干旱胁迫能力的有效性。3.幼苗干旱胁迫适应性研究表明,干旱胁迫抑制了幼苗叶片叶绿素的合成,但是促进了根及根茎次生代谢产物龙胆苦苷的积累,壳聚糖可缓解干旱逆境给幼苗带来的伤害,高浓度壳聚糖与干旱胁迫协同促进了龙胆苦苷的累积。4.从药材折干率,指标性成分含量,重金属农残检测结果综合来看,清原县湾甸子镇栽培龙胆的质量较高,但应警戒Cd元素超标的问题,加强土地的清洁度管理。
【学位单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S567.239
【部分图文】：

图 2 PEG 对龙胆种子累计发芽率的影响3.3 水分胁迫对龙胆种子发芽势，发芽指数的影响由表 1 可知，PEG 质量分数在 0-5%范围内，龙胆种子的发芽指数和发芽势呈现升高的趋势，而后随着 PEG 浓度的加大，发芽势和发芽指数逐步降低。对照组和 5%浓度组的种子日发芽数在第 8 天达到最高，故两组种子的发芽势定在第 8 天，分别为 34.67%和 36.67%。10%浓度组种子的发芽势定在第 10 天，为28%，15%浓度组发芽势延迟到第 12 天，为 24.67%.由此可见，PEG 质量分数的加大，会导致发芽势天数的延后，减弱种子的萌发能力。其中 5%，10%浓度组种子的发芽指数与对照组相比无显著性差异，15%浓度组与对照组比较有显著性差异（P＜0.05），20%浓度组与对照组比较有极显著性差异（P＜0.01）。说明此时 PEG 浓度超过了龙胆种子萌发过程的渗透调节承受限度，对种子的萌发和

图 3 NaCl 胁迫对龙胆种子发芽率的影响4.2 NaCl 胁迫对龙胆种子相对发芽率的影响为进一步研究龙胆种子的耐盐程度，将相对发芽率与相对应的盐浓度之间进行相关回归分析，如图 4，结果表明，NaCl 胁迫下的相对发芽率随盐溶液浓度的升高而降低，相对发芽率与 NaCl 溶液浓度表现出显著的负相关（P＜0.05），相关系数为 0.8510，回归方程为：y=-19.427x+100.10。以相对发芽率的 75%、50%、25%时所对应的 NaCl 浓度作为龙胆种子发芽时盐胁迫的适宜值、临界值和极限值。得出 NaCl 胁迫时，龙胆种子在萌发期间盐胁迫的适宜值为 13.15 mmol/L，临界值为 71.06 mmol/L，极限值为 128.97 mmol/L。

图 3 NaCl 胁迫对龙胆种子发芽率的影响4.2 NaCl 胁迫对龙胆种子相对发芽率的影响为进一步研究龙胆种子的耐盐程度，将相对发芽率与相对应的盐浓度之间进行相关回归分析，如图 4，结果表明，NaCl 胁迫下的相对发芽率随盐溶液浓度的升高而降低，相对发芽率与 NaCl 溶液浓度表现出显著的负相关（P＜0.05），相关系数为 0.8510，回归方程为：y=-19.427x+100.10。以相对发芽率的 75%、50%、25%时所对应的 NaCl 浓度作为龙胆种子发芽时盐胁迫的适宜值、临界值和极限值。得出 NaCl 胁迫时，龙胆种子在萌发期间盐胁迫的适宜值为 13.15 mmol/L，临界值为 71.06 mmol/L，极限值为 128.97 mmol/L。
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 胡晗绯;胡军华;吴云;黄文哲;王振中;;辛紫通鼻颗粒HPLC多波长融合指纹图谱研究[J];化工管理;2019年08期

2 蒋小文;;HPLC法测定麝香追风膏中盐酸麻黄碱含量[J];中国药物警戒;2016年11期

3 冯宁;谢志朋;;HPLC法测定胃得安胶囊中盐酸小檗碱的含量[J];临床合理用药杂志;2016年34期

4 周海燕;田壮;李聪;郭凯;肖苏萍;;HPLC测定天地从容酒中松果菊苷的含量[J];中国现代中药;2016年09期

5 张婷婷;卜亚芹;;HPLC法测定复方天麻颗粒中天麻素的含量[J];中国卫生工程学;2016年06期

6 吴凡;刘继华;王莹;;HPLC法测定烟酰胺片的含量[J];海峡药学;2016年11期

7 常欣;崔慧芳;;HPLC法测定清热散结片中木犀草素的含量[J];海峡药学;2016年11期

8 刁全平;侯冬岩;郭华;回瑞华;;HPLC法测定牛黄解毒片中蒽醌类化合物的含量[J];鞍山师范学院学报;2016年04期

9 王珏;张毕奎;戴迎春;;HPLC法测定古汉养生精片(口服液)中淫羊藿苷的含量[J];甘肃医药;2016年11期

10 杨正腾;陈小媛;马家宝;陈勇;李耀华;;健脑益血合剂中马钱苷含量的HPLC法测定[J];中医药导报;2016年22期

相关博士学位论文 前10条

1 徐寒子;脂质体姜黄素的制备及其与放疗联合治疗子宫内膜癌基础和临床前研究[D];南京中医药大学;2018年

2 王凌晖;何首乌野生种质资源地理变异与种源初步选择[D];南京林业大学;2005年

3 王晓华;桂郁金HPLC指纹图谱及其生物活性研究[D];成都中医药大学;2013年

4 李宜融;树豆叶的HPLC指纹图谱研究[D];广州中医药大学;2012年

5 张清安;沙苑子中酚类物质研究及其抗氧化成分的HPLC筛选[D];陕西师范大学;2010年

6 何建雄;银翘柴桂汤HPLC指纹图谱及其体外抑制流感病毒作用研究[D];广州中医药大学;2011年

7 王强;红景天种子休眠生理与蛋白质HPLC生化标记鉴定技术的研究[D];浙江大学;2003年

8 翟红昌;基于HPLC技术的南海北部浮游植物色素与群落结构研究[D];中国海洋大学;2010年

9 王永红;两性霉素B降解产物研究及其HPLC方法与微生物测定法含量测定结果的量值统一[D];中国协和医科大学;2010年

10 楚延锋;新型聚乙二醇—聚天冬氨酸衍生物药物载体的合成及医用高分子HPLC的表征[D];武汉大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 陶玲;辽宁省栽培龙胆质量及种子幼苗逆境胁迫适应性研究[D];辽宁中医药大学;2018年

2 徐鹏程;龙井茶HPLC品质指纹图谱的构建与应用研究[D];浙江大学;2017年

3 黄晓洁;不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱研究及应用[D];广州中医药大学;2014年

4 刘雅晶;恩拉霉素高效液相色谱（HPLC）检测方法的建立[D];江西农业大学;2016年

5 赵元煜;HPLC指纹图谱技术检测食品中金黄色葡萄球菌的研究[D];河北农业大学;2014年

6 王丽美;单面针药用成分HPLC指纹图谱及其质量评价研究[D];中南林业科技大学;2013年

7 杜冰;鸡冠花HPLC指纹图谱及止血部位的筛选[D];黑龙江中医药大学;2013年

8 宋杨;佩兰和射干抗病毒注射液HPLC研究[D];沈阳药科大学;2009年

9 丁姗姗;动物性食品中三氮脒及氯氰碘柳胺残留的HPLC检测方法研究[D];扬州大学;2011年

10 刘桂丽;HPLC法测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量[D];复旦大学;2011年

本文编号：2862374