甘蔗割手密种染色体特异BAC-FISH探针的开发与应用

发布时间：2021-01-14 16:01

　　甘蔗是世界上最重要的农作物之一,生产约世界70%的糖。割手密被认为是现代栽培甘蔗的抗逆性、适应性基因的重要来源。割手密染色体数目众多（2n = 40-128）,且染色体较小,形态相似。因此,根据传统的细胞遗传学方法来区分不同的染色体是非常困难的,这阻碍了割手密在细胞学方面研究工作的开展。本研究主要是利用甘蔗与高粱的良好共线性,借助比较基因组学的手段,筛选割手密单低拷贝序列,开发割手密染色体特异的细胞学标记。主要研究结果如下:（1）通过比较基因学手段,将割手密单倍体材料AP85-441（2n =4x = 32）的BAC文库序列与高粱基因组序列进行比对,共获得了164个低拷贝的BAC序列,这些序列均匀地分布在高粱10条染色体的长臂和短臂上。采用PCR方法对所构建的两维BAC混合池进行筛选,准确筛选到84个所需的阳性克隆。（2）将所筛选到的84个阳性克隆的DNA标记为探针,进行BAC-FISH分析,共鉴定了 42个探针可在割手密AP85-441染色体上获得特异信号,信号数从1到4不等。42个特异探针,高粱的2号、5号、9号和10号染色体各有2个,4号和8号染色体各有4个,1号染色体有5个,7... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－２?ＡＰ８５－４４１?ＢＡＣ文库的１６４个单低拷贝序列在高粱１－１０号染色体的分布情况

１?ＯＯｂｐ?二Ｉ??图２－３?ＰＣＲ筛选文库的引物特异性验证（部分數据）。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｔｈｅ?ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒ?ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ?ｆｏｒ?ＰＣＲ?ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｔｈｅ?ｌｉｂｒａｒｙ?（ｐａｒｔｉａｌ?ｄａｔａ）．??注：Ｍ－Ｍａｒｋｅｒ?（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ，?ＤＬ２０００）?；２１－３５?代表相应的?ＢＡＣ?编号??Ｎｏｔｅ：Ｍ－Ｍａｒｋｅｒ?（ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ，?ＤＬ２０００）?；?２１－３５?ｔｈｅ?ＢＡＣ－?ｎｕｍｂｅｒ．??＇＜０ｌ：）＾＾ＰＢＫ３ＨＩＩ＾３ＨＳ９［＾３Ｖｒ９ｗ！＾Ｐ９ＢＲＲ?！，＂＇：，ｈ：＞￣，Ｃ３??ｆ｛?；：ｂ?－＾－＾Ｓ?—?？＇?」１?：?ｙ＇．？’Ｋ；ｉ??ｌＯＯｂｐ?－ｉ＊ｎ－＂?；／?＾?—??图２－４?ＰＣＲ筛选ｓｕｐｅｒ－ｐｏｏｌ混合池，阳性板号的确定（部分數据）。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?ＰＣＲ?ｓｃｒｅｅｎ?ｔｈｅ?ｓｕｐｅｒ－ｐｏｏｌｓ，?ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ?ｔｈｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｐｌａｔｅ?ｎｕｍｂｅｒ?（ｐａｒｔｉａｌ?ｄａｔａ）．??注：Ｍ－Ｍａｒｋｅｒ?（ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ，?ＤＬ２０００）?；?０代表以割手密基因组为模板的阳性对照；５－１２表示３８４??孔板板号；红色箭头表示无阳性条带，绿色箭头表示多条阳性条带。??Ｎｏｔｅ：?Ｍ－Ｍａｒｋｅｒ?（ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ

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【参考文献】：
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本文编号：2977139