甘蔗原生质体的融合及杂核细胞再生条件的优化
发布时间：2021-02-22 00:44
蔗糖是我国食糖的主要来源。全国一半以上的糖产量来自于广西,广西甘蔗种植面积108.15万公顷,占全国60%。寒害是是甘蔗面临的灾害之一,甘蔗受冻以后,出现大面积甘蔗叶片干枯、生长点死一亡、蔗茎呈水煮状、侧芽严重损伤、蔗糖分转化、蔗汁纯度下降,产糖率下降,品质变劣,影响蔗糖产量,造成很大的经济损失。新台糖22号作为广西甘蔗的当家品种,具有高萌芽率、高分蘖率、高产高糖、耐旱等很好的农艺性状,但这个品种耐寒性差。桂糖28号具有高糖耐寒性等特性,可以在育种上作为一个很好的基因库加以利用,用新台糖22号和桂糖28号来进行细胞融合育种,把它们的优良基因进行重组,可能会得出的优良农艺性状和抗寒性更强的杂交后代。与其他育种方式相比,细胞融合具有不受种属的局限,克服性细胞的不融合,可以转移大量的基因,还可获得多个数量遗传性状的表达,可同时转录细胞质和细胞核基因等优点。但在甘蔗育种上的应用尚不多见。本文研究了（1）甘蔗原生质体的冻存复苏条件的优化（2）互补抑制剂碘乙酰胺（IOA）和罗丹明6G（R-6G）的浓度的优化（3）PEG融合和电融合条件的优化（4）融合后原生质体培养条件的优化。研究结果表明:1.不同...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２甘蔗不同部位冻存后活力??
ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ?Ａｒｒｏｗｓ?ｐｏｉｎｔ?ｔｏ?ｔｈｅ?ｄｅａｄ?ｃｅｌｌｓ?（Ｂａｒ＝?１０?（ｉｍ）??３．１．１．３不同冻存温度对甘蔗原生质体活力的影响??由图３可看出，冻存７?ｄ后复苏，不同冻存温度（４?°Ｃ、－８０?°Ｃ、－１９６?°Ｃ）下原生??质体活力差异不显著；冻存３０ｄ和６０ｄ后复苏，－８０?°Ｃ和－１９６?°Ｃ的原生质体活力差异??不显著，但显著高于４?°Ｃ处理，分别高４０％和６０％，达到显著性差异；冻存９０?ｄ后复??苏，－１９６?°Ｃ原生质体活力最高，４?°Ｃ处理最低，－１９６?°Ｃ中复苏的原生质体活力较－??８０?°Ｃ处理高２２．８１％，较４?°Ｃ处理高７Ｌ３７％，差异显著。处理时间对在液氮－１９６?°Ｃ中??冻存的原生质体活力影响不显著。??２１??
于荧光显微镜下观察，发现细胞周围均无蓝色荧光，说明培养１?ｄ没有形成细胞壁（图??４Ａ），培养２－３?ｄ之后，在荧光显微镜下可看到由于ＶＢＬ和细胞壁的纤维素结合而??在细胞周围开始发出淡蓝色的荧光（图４?Ｂ），培养５－６?ｄ左右，在荧光显微镜下观??察到整个细胞边缘蓝色荧光均匀、强烈且明显（图４?Ｃ），表明细胞壁在逐渐形成，??５?ｄ左右基本形成完整。??２２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠精子体外培养过程中Ca2+对微管蛋白乙酰化的影响[J]. 甄林青,杨强震,王立蕊,徐芳,张宇静,谢硕,冯健,李新红. 上海交通大学学报(农业科学版). 2016(02)
[2]基于VBL增白剂细胞染色的水稻原生质体细胞壁变化检测[J]. 柳琳,陈越,陈玲,李维蛟,程在全. 贵州农业科学. 2014(11)
[3]荔枝TPEC与龙眼EC的电融合参数研究[J]. 黄浅,赖钟雄,赖呈纯,顾金玲,吴金寿. 福建农林大学学报(自然科学版). 2014(04)
[4]苜蓿原生质体电融合适宜条件的筛选[J]. 张凌云,师尚礼. 草地学报. 2013(04)
[5]碘乙酰胺和罗丹明对苜蓿原生质体失活效果的效应[J]. 李玉珠,师尚礼,陶茸,张凌云. 草原与草坪. 2012(03)
[6]海带染色体的DAPI染色及核型初步分析[J]. 刘宇,毕燕会,周志刚. 水产学报. 2012(01)
[7]草地早熟禾原生质体培养与融合[J]. 赵小强,马晖玲,周万海,林栋. 核农学报. 2010(04)
[8]棉花原生质体“供-受体”双失活融合产生种间杂种植株及其鉴定[J]. 付莉莉,杨细燕,张献龙,王志伟,冯常辉,刘传祥,江培勇,张金龙. 科学通报. 2009(15)
[9]割手密茎尖细胞有丝分裂过程中微管骨架的变化[J]. 李志刚,李素丽,张荣华,杨丽涛,李杨瑞. 广西植物. 2009(04)
[10]芦荟原生质体的电融合研究[J]. 邢朝云,王剑文. 抗感染药学. 2009(02)
博士论文
[1]苜蓿与百脉根原生质体培养及体细胞杂交的研究[D]. 李玉珠.甘肃农业大学 2012
[2]棉花原生质体培养与体细胞杂交研究[D]. 汪静儿.浙江大学 2007
[3]柑橘原生质体融合及体细胞杂种核质遗传研究[D]. 徐小勇.华中农业大学 2006
[4]棉花原生质体培养和原生质体对称融合研究[D]. 孙玉强.华中农业大学 2005
[5]三种豆科牧草的原生质体培养及体细胞杂交[D]. 金红.西北大学 2002
硕士论文
[1]杨树茎尖小RNA组学和种子萌发技术研究[D]. 陆维超.扬州大学 2017
[2]甘蔗离体培养的胚性细胞团诱导与分化研究[D]. 杨燕妮.广西大学 2011
[3]二乔刺槐愈伤组织超低温保存及植株再生[D]. 程斐.河南农业大学 2009
[4]不同分生组织类型蔬菜根及边缘细胞对镉的响应[D]. 张贤仕.四川农业大学 2009
[5]影响甘蔗原生质体分离、培养因素的研究[D]. 洪翠.福建农林大学 2000
本文编号：3045170
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２甘蔗不同部位冻存后活力??
ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ?ｒｅｃｏｖｅｒｙ?Ａｒｒｏｗｓ?ｐｏｉｎｔ?ｔｏ?ｔｈｅ?ｄｅａｄ?ｃｅｌｌｓ?（Ｂａｒ＝?１０?（ｉｍ）??３．１．１．３不同冻存温度对甘蔗原生质体活力的影响??由图３可看出，冻存７?ｄ后复苏，不同冻存温度（４?°Ｃ、－８０?°Ｃ、－１９６?°Ｃ）下原生??质体活力差异不显著；冻存３０ｄ和６０ｄ后复苏，－８０?°Ｃ和－１９６?°Ｃ的原生质体活力差异??不显著，但显著高于４?°Ｃ处理，分别高４０％和６０％，达到显著性差异；冻存９０?ｄ后复??苏，－１９６?°Ｃ原生质体活力最高，４?°Ｃ处理最低，－１９６?°Ｃ中复苏的原生质体活力较－??８０?°Ｃ处理高２２．８１％，较４?°Ｃ处理高７Ｌ３７％，差异显著。处理时间对在液氮－１９６?°Ｃ中??冻存的原生质体活力影响不显著。??２１??
于荧光显微镜下观察，发现细胞周围均无蓝色荧光，说明培养１?ｄ没有形成细胞壁（图??４Ａ），培养２－３?ｄ之后，在荧光显微镜下可看到由于ＶＢＬ和细胞壁的纤维素结合而??在细胞周围开始发出淡蓝色的荧光（图４?Ｂ），培养５－６?ｄ左右，在荧光显微镜下观??察到整个细胞边缘蓝色荧光均匀、强烈且明显（图４?Ｃ），表明细胞壁在逐渐形成，??５?ｄ左右基本形成完整。??２２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠精子体外培养过程中Ca2+对微管蛋白乙酰化的影响[J]. 甄林青,杨强震,王立蕊,徐芳,张宇静,谢硕,冯健,李新红. 上海交通大学学报(农业科学版). 2016(02)
[2]基于VBL增白剂细胞染色的水稻原生质体细胞壁变化检测[J]. 柳琳,陈越,陈玲,李维蛟,程在全. 贵州农业科学. 2014(11)
[3]荔枝TPEC与龙眼EC的电融合参数研究[J]. 黄浅,赖钟雄,赖呈纯,顾金玲,吴金寿. 福建农林大学学报(自然科学版). 2014(04)
[4]苜蓿原生质体电融合适宜条件的筛选[J]. 张凌云,师尚礼. 草地学报. 2013(04)
[5]碘乙酰胺和罗丹明对苜蓿原生质体失活效果的效应[J]. 李玉珠,师尚礼,陶茸,张凌云. 草原与草坪. 2012(03)
[6]海带染色体的DAPI染色及核型初步分析[J]. 刘宇,毕燕会,周志刚. 水产学报. 2012(01)
[7]草地早熟禾原生质体培养与融合[J]. 赵小强,马晖玲,周万海,林栋. 核农学报. 2010(04)
[8]棉花原生质体“供-受体”双失活融合产生种间杂种植株及其鉴定[J]. 付莉莉,杨细燕,张献龙,王志伟,冯常辉,刘传祥,江培勇,张金龙. 科学通报. 2009(15)
[9]割手密茎尖细胞有丝分裂过程中微管骨架的变化[J]. 李志刚,李素丽,张荣华,杨丽涛,李杨瑞. 广西植物. 2009(04)
[10]芦荟原生质体的电融合研究[J]. 邢朝云,王剑文. 抗感染药学. 2009(02)
博士论文
[1]苜蓿与百脉根原生质体培养及体细胞杂交的研究[D]. 李玉珠.甘肃农业大学 2012
[2]棉花原生质体培养与体细胞杂交研究[D]. 汪静儿.浙江大学 2007
[3]柑橘原生质体融合及体细胞杂种核质遗传研究[D]. 徐小勇.华中农业大学 2006
[4]棉花原生质体培养和原生质体对称融合研究[D]. 孙玉强.华中农业大学 2005
[5]三种豆科牧草的原生质体培养及体细胞杂交[D]. 金红.西北大学 2002
硕士论文
[1]杨树茎尖小RNA组学和种子萌发技术研究[D]. 陆维超.扬州大学 2017
[2]甘蔗离体培养的胚性细胞团诱导与分化研究[D]. 杨燕妮.广西大学 2011
[3]二乔刺槐愈伤组织超低温保存及植株再生[D]. 程斐.河南农业大学 2009
[4]不同分生组织类型蔬菜根及边缘细胞对镉的响应[D]. 张贤仕.四川农业大学 2009
[5]影响甘蔗原生质体分离、培养因素的研究[D]. 洪翠.福建农林大学 2000
本文编号：3045170
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