桔梗同源四倍体与二倍体生理特性和遗传变异研究

发布时间：2021-02-26 13:56

　　本研究采用植物组织培养和多倍体诱导相结合的方法获得了桔梗同源四倍体试管苗,并对桔梗二倍体与同源四倍体试管苗的生理特性、遗传变异及DNA的甲基化差异做了初步探讨,以期为桔梗四倍体优良品种的选育提供理论依据。本论文的主要研究内容如下:1、本研究以内蒙古赤峰市生产的桔梗种子为试验材料,用0.1%的HgC12消毒后建立无菌系,并对桔梗无菌苗的增殖培养基及生根培养基进行优化,在建立桔梗无菌快繁体系的基础上,利用0.05%、0.1%及0.2%的秋水仙素溶液浸泡不定芽诱导桔梗同源四倍体,采用形态鉴别、根尖染色体鉴定和流式细胞仪分析相结合的方法鉴定其倍性。结果表明,桔梗无菌苗增殖的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.3 mg·L-1,最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.6mg·L-1;桔梗同源四倍体诱导的最适条件是用0.2%的秋水仙素（加0.02 g.mL-1二甲基亚砜）混合液处理桔梗不定芽12 h,诱导率达到 32.0%。2、以桔梗二倍体及人工诱导的同源四倍体为试验材料,研究比较桔梗二倍体与同源四倍体的生长和生理特性。结果表明桔梗四倍体试管苗较粗壮,叶片大且厚,颜色较深,四... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１桔梗丛生芽（Ａ）和根（Ｂ）??Ｆｉｇ．２－１?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｓｈｏｏｔｓ?ｃｌｕｍｐｓ?（Ａ）?ａｎｄ?ｒｏｏｔｉｎｇ?（Ｂ）?ｏｆ?Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ?＾ｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ?Ａ．ＤＣ．??

??一般而言，四倍体植株具有巨型化特征，将形态变异明显的植株（图２－２）先经??流式细胞仪分析后，再用根尖压片法鉴定。结果表明，桔梗二倍体植株根尖染色体数??为２ｎ＝２ｘ＝１８?（图２－３，?Ａ），ＤＮＡ相对含量在１５０处有１个单峰（图２－３，?Ｃ）；同源四??倍体植株染色体数为２ｎ＝４ｘ＝３６?（图２－３，?Ｂ），ＤＮＡ相对含量在３００处有１个单峰（图??２－３，?Ｄ）。???？??Ａ?＾??ｌａ?Ｊ５?，，??＂?ｏ?Ｓ?＊＇??Ｍ?ｃ?＼?ｉ）??？?１?－??????？…ｉＶ＾Ａ－ｗ－丨“、．???．??—???——＿＿??Ｈ?２ＭＭ?４＊ＩＨ?ｆｉＨＨ?Ｈ（＊？?Ｉ?？？Ｈ?Ｈ?ｚ＂？?？＊Ｍ４？?？＞ＨＭ?＇？？？?＊?ＭＨＭ??图２－３桔梗二倍体和四倍体鉴定图??Ｆｉｇ．２－３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ?ａｎｄ?ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?〇「尸??Ａ：：倍体染色体数（２丨尸２ｘ＝丨８）：?Ｂ：四倍体染色体数（２ｎ＝４ｘ＝３６）??Ｃ：二倍体ＤＮＡ相对含量；?Ｄ：四倍体ＤＮＡ相对含量??Ａ：?Ｔｈｅ?ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ；?Ｂ：?Ｔｈｅ?ｃｈｒｏｉｎｏｓｏｉｎｅ?ｏｆ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ??Ｃ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ；?Ｄ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｏｆ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ??２．３讨论??２．３．１桔梗无菌快繁体系的建立和优化??在植物组织培养中

?５?１?ＯＯｂｐ??ＳＯｔ＞ｐ＞??图４－１桔梗二倍体及其同源四倍体ＳＲＡＰ的ＰＣＲ扩增电泳图谱??Ｆｉｇ．４－１?Ｔｈｅ?ＳＲＡＰ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ?ａｎｄ?ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?ｏｆ?Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ?ｇｒａｎｄｉｆｈｒｕｍ?Ａ．ＤＣ??（ｐｌ－ｐｌ２为丨２条引物组合，２ｘ为二倍体，４ｘ为四倍体，Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００，圆圈为部分差??异条带）??（ｐ?１?－ｐ?１２?ｉｓ?１２?ｐｒｉｍｅｒ?ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?２ｘ?ｉｓ?ｄｉｐｌｏｉｄ，?４ｘ?ｉｓ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ，?Ｍ?ｉｓ?ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００，?ｃｉｒｃｌｅ?ｉｓ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ?ｂａｎｄｓ．）??４．２．２桔梗二倍体及同源四倍体基因组ＡＦＬＰ分析??采用２４对ＡＦＬＰ引物对桔梗二倍体及其同源四倍体的ＤＮＡ多态性进行统计，结??災见农４－４。２４对引物共扩增出４７７条位于８０？５００?ｂｐ的ＤＮＡ片段，平均每对引物扩??培出２０条ＤＮＡ片段，其中多态性片段有１３条，９条为二倍体特有条带，４条四倍体??特有条带，多态性条带数占总条带数的２．７３％。由上述结果可以看出，桔梗不同倍性??之问人部分引物组合扩增出的ＡＦＬＰ条带没有明显差异，说明染色体加倍后，只有极??少部分ＤＮＡ碱基序列发生改变

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本文编号：3052684