小麦逆境胁迫响应基因Tamyb01和Tapp2c01的克隆及功能验证
发布时间：2021-03-17 23:54
小麦（Triticum aestivum L.）是我国重要的粮食作物,对粮食安全和经济发展具有重要的作用。本研究以冬性小麦京841为材料,以从前期转录组Illumina高通量测序结果中筛选出的2个抗逆相关基因Tapp2c01和Tamyb01为目的基因,克隆并系统分析了在逆境胁迫过程中两个基因的表达特性,利用病毒诱导的基因沉默技术和构建过表达载体并进行遗传转化验证基因功能。主要研究结果如下:1.Tapp2c01基因的的编码框为960bp,编码320个氨基酸,编码蛋白预测的分子量为34.7KD,等电点PI为8.41;有4个外显子和3个内含子;保守结构域分析显示:Tapp2c01基因第82-317位氨基酸有一个PP2C结构域,属于PP2C家族;不同物种PP2C蛋白同源序列比对结果表明,Tapp2c01编码的氨基酸与乌拉图小麦、山羊草的PP2C蛋白亲缘关系最近,其次是籼稻;和菠萝、葡萄等的PP2C蛋白亲缘关系相对较远。2.荧光定量结果表明:干旱胁迫处理（20%PEG6000）下,Tapp2c01基因呈正调控表达。在根尖组织中,小麦Tapp2c01基因的表达量呈先增加在减少后增加的趋势。在胁迫处...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
类蛋白磷酸酶的结构分析
方法料选用普通小麦（Triticum aestivum L.）品种为京 841（J841），由河技术研究中心繁殖提供。株与质粒载体所用大肠杆菌菌株（Escherichia coli）为 DH5α，根癌农杆菌菌株（ALBA4404，克隆载体为 pMD19-T，均购自于大连宝生物（Takara体为 pCAMBIA1304 载体（图 2），由本实验室保存扩繁。病毒载体SMV-γ，由河南科技大学马超博士馈赠。（两图 2）
图 3-ARNA 电泳检测 图 3-B -actin 基因检测反转录产物.3-A the electrophoresis detection of RNA Fig.3-B Reverse transcription product detectio2 Tapp2c01 基因的克隆及表达特性分析2.1 Tapp2c01 基因的克隆及序列分析以京 841 叶片提取的 RNA 反转录的 cDNA 为模板，以 Tapp2c01-F1 和 Tapp2c01-R，PCR 扩增得到产物大小为 1141bp 左右，与预期产物大小一致（图 4-A）。将用 DNA 凝胶回收试剂盒进行回收。连接至 pMD19-T 载体后转化至大肠杆菌 DH正确的阳性克隆（图 4-B）送至北京华大基因公司测序，作进一步的序列分析。
本文编号：3087915
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
类蛋白磷酸酶的结构分析
方法料选用普通小麦（Triticum aestivum L.）品种为京 841（J841），由河技术研究中心繁殖提供。株与质粒载体所用大肠杆菌菌株（Escherichia coli）为 DH5α，根癌农杆菌菌株（ALBA4404，克隆载体为 pMD19-T，均购自于大连宝生物（Takara体为 pCAMBIA1304 载体（图 2），由本实验室保存扩繁。病毒载体SMV-γ，由河南科技大学马超博士馈赠。（两图 2）
图 3-ARNA 电泳检测 图 3-B -actin 基因检测反转录产物.3-A the electrophoresis detection of RNA Fig.3-B Reverse transcription product detectio2 Tapp2c01 基因的克隆及表达特性分析2.1 Tapp2c01 基因的克隆及序列分析以京 841 叶片提取的 RNA 反转录的 cDNA 为模板，以 Tapp2c01-F1 和 Tapp2c01-R，PCR 扩增得到产物大小为 1141bp 左右，与预期产物大小一致（图 4-A）。将用 DNA 凝胶回收试剂盒进行回收。连接至 pMD19-T 载体后转化至大肠杆菌 DH正确的阳性克隆（图 4-B）送至北京华大基因公司测序，作进一步的序列分析。
本文编号：3087915
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3087915.html
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