葫芦科植物雪胆鲨烯合酶SS基因克隆及正选择进化分析
发布时间：2021-03-19 12:23
鲨烯合酶（squalene synthase,SS）是植物三萜生物合成通路中的一个关键酶,能催化两分子的法呢基焦磷酸（farnesyl pyrophosphate,FPP）缩合生成鲨烯（Squalene,SQ）,SS在三萜合成通路中对后续产物有着至关重要的作用,其活性决定了后续产物的合成。近年来人们越来越重视如何提高SS的活性来增加三萜皂苷的含量。本研究采用cDNA末端快速扩增技术3’RACE及5’RACE的方法首次克隆得到雪胆鲨烯合酶SS基因全长cDNA序列,同时对雪胆SS进行了生物信息学和正选择进化分析,为探索正选择位点与雪胆SS活性功能位点的潜在关系的奠定了基础,在氨基酸的进化水平上探讨三萜皂苷生物合成机制,希望能为增加三萜类皂苷产量提供有价值的信息。本论文的主要研究结果如下:1、雪胆SS基因的克隆:本研究主要采用3’RACE及5’RACE基因扩增的方法,分别得到1200bp,630bp左右的序列,拼接得到雪胆SS基因cDNA序列,序列长度为1609 bp,其中ORF序列长度为1254 bp,编码417个氨基酸残基,经预测,雪胆SS蛋白的分子量大小约为47.81kD。2、雪胆SS...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三萜合成通路反应步骤Fig.1.Thereactionstepsintriterpenoidsbiosynthesispathway
1.2 实验仪器表 1-1 本实验所需相关仪器设备Table 1-1 The related experimental equipments in our research仪器与型号 仪器厂家PCR 仪 Biometra An Analylik Jena CompanyWD-9403F 紫外仪 北京六一仪器厂微波炉 格兰仕微波炉电器有限公司多功能搅拌器 HJ-5 常州国华电器有限公司DYY-10C 型电泳仪 北京六一仪器厂图 1-1 雪胆植物的块根和叶子Fig.1-1 The root and leaves of Hemsleya chinensis
用DNAMAN软件拼接和人工校对雪胆SS基因得雪胆 SS 基因全长 cDNA 序列。与分析胆总 RNA 电泳检测照 RNAiso Plus RNA 提取试剂盒的方法提取-free 水溶解雪胆总 RNA，利用蛋白核酸分析仪示雪胆 RNA 的 A260/A280 比值为 1.9，表明满足克隆雪胆 cDNA 全长的需要。经 1.5%琼 28S，18S，5.8S 的条带清晰分明(图 1-2)，可见的雪胆总 RNA 可用于后续的克隆实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究[J]. 崔卓栋,柴丹,解长占,溫树波,张萍,朱羿龙,刘云霞,李一权,田明尧,金宁一. 病毒学报. 2017(01)
[2]雪胆属植物的研究[J]. 李叶丹,孙晓波,季宇彬,许旭东,马国需. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]青皮苦瓜鲨烯合酶基因ORF序列的克隆和正选择分析[J]. 钱洁颖,马成通,晁耐霞,陈奇聪,蓝秀万,孙健,吴耀生. 基因组学与应用生物学. 2016(08)
[4]定点突变提高极端嗜热α-淀粉酶ApkA的高温活性和热稳定性[J]. 曾静,郭建军,袁林. 食品科学. 2017(02)
[5]雪胆属植物的化学成分及生物活性研究进展[J]. 李莹,徐晓婷,郑重飞,李玲,姚庆强. 中草药. 2015(18)
[6]植物在低温胁迫下的糖代谢研究进展[J]. 孙永梅,刘丽杰,冯明芳,王军虹,苍晶,李速,包雨卓,王秀田. 东北农业大学学报. 2015(07)
[7]三萜皂苷结构及应用的研究进展[J]. 唐瑶,陈洋,曹婉鑫. 安徽化工. 2015(02)
[8]红花栝楼鲨烯合酶基因的克隆及其序列分析[J]. 陶晨陈,马成通,吴耀生,周青鸟,苏荷玲,晁耐霞,罗育. 中草药. 2015(07)
[9]三萜皂苷生物合成途径及关键酶的研究进展[J]. 许晓双,张福生,秦雪梅. 世界科学技术-中医药现代化. 2014(11)
[10]2个丹参鲨烯合酶基因的克隆和鉴定[J]. 马艺沔,袁丽钗,张林甦,侯学敏,卢善发. 中草药. 2014(09)
博士论文
[1]拟南芥转录因子WRKY71对花和分枝发育的调控机制研究[D]. 于延冲.山东大学 2011
硕士论文
[1]葫芦科栝楼属植物鲨烯合酶SS基因克隆及原核表达[D]. 马成通.广西医科大学 2016
[2]Collapsin反应调节蛋白家族在神经系统中的适应性进化与正选择位点分析[D]. 唐艳艳.广西医科大学 2014
[3]拟南芥WRKY基因家族的进化研究[D]. 郝博济.天津大学 2014
[4]植物三萜合成通路关键酶基因的适应性进化研究[D]. 刘镛.广西医科大学 2013
本文编号：3089561
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三萜合成通路反应步骤Fig.1.Thereactionstepsintriterpenoidsbiosynthesispathway
1.2 实验仪器表 1-1 本实验所需相关仪器设备Table 1-1 The related experimental equipments in our research仪器与型号 仪器厂家PCR 仪 Biometra An Analylik Jena CompanyWD-9403F 紫外仪 北京六一仪器厂微波炉 格兰仕微波炉电器有限公司多功能搅拌器 HJ-5 常州国华电器有限公司DYY-10C 型电泳仪 北京六一仪器厂图 1-1 雪胆植物的块根和叶子Fig.1-1 The root and leaves of Hemsleya chinensis
用DNAMAN软件拼接和人工校对雪胆SS基因得雪胆 SS 基因全长 cDNA 序列。与分析胆总 RNA 电泳检测照 RNAiso Plus RNA 提取试剂盒的方法提取-free 水溶解雪胆总 RNA，利用蛋白核酸分析仪示雪胆 RNA 的 A260/A280 比值为 1.9，表明满足克隆雪胆 cDNA 全长的需要。经 1.5%琼 28S，18S，5.8S 的条带清晰分明(图 1-2)，可见的雪胆总 RNA 可用于后续的克隆实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究[J]. 崔卓栋,柴丹,解长占,溫树波,张萍,朱羿龙,刘云霞,李一权,田明尧,金宁一. 病毒学报. 2017(01)
[2]雪胆属植物的研究[J]. 李叶丹,孙晓波,季宇彬,许旭东,马国需. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]青皮苦瓜鲨烯合酶基因ORF序列的克隆和正选择分析[J]. 钱洁颖,马成通,晁耐霞,陈奇聪,蓝秀万,孙健,吴耀生. 基因组学与应用生物学. 2016(08)
[4]定点突变提高极端嗜热α-淀粉酶ApkA的高温活性和热稳定性[J]. 曾静,郭建军,袁林. 食品科学. 2017(02)
[5]雪胆属植物的化学成分及生物活性研究进展[J]. 李莹,徐晓婷,郑重飞,李玲,姚庆强. 中草药. 2015(18)
[6]植物在低温胁迫下的糖代谢研究进展[J]. 孙永梅,刘丽杰,冯明芳,王军虹,苍晶,李速,包雨卓,王秀田. 东北农业大学学报. 2015(07)
[7]三萜皂苷结构及应用的研究进展[J]. 唐瑶,陈洋,曹婉鑫. 安徽化工. 2015(02)
[8]红花栝楼鲨烯合酶基因的克隆及其序列分析[J]. 陶晨陈,马成通,吴耀生,周青鸟,苏荷玲,晁耐霞,罗育. 中草药. 2015(07)
[9]三萜皂苷生物合成途径及关键酶的研究进展[J]. 许晓双,张福生,秦雪梅. 世界科学技术-中医药现代化. 2014(11)
[10]2个丹参鲨烯合酶基因的克隆和鉴定[J]. 马艺沔,袁丽钗,张林甦,侯学敏,卢善发. 中草药. 2014(09)
博士论文
[1]拟南芥转录因子WRKY71对花和分枝发育的调控机制研究[D]. 于延冲.山东大学 2011
硕士论文
[1]葫芦科栝楼属植物鲨烯合酶SS基因克隆及原核表达[D]. 马成通.广西医科大学 2016
[2]Collapsin反应调节蛋白家族在神经系统中的适应性进化与正选择位点分析[D]. 唐艳艳.广西医科大学 2014
[3]拟南芥WRKY基因家族的进化研究[D]. 郝博济.天津大学 2014
[4]植物三萜合成通路关键酶基因的适应性进化研究[D]. 刘镛.广西医科大学 2013
本文编号：3089561
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3089561.html
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