基于SSR的棉花品种分子检测技术体系的建立与应用

发布时间：2021-03-25 23:53

　　棉花优良品种是保证棉花优质、高产、可持续发展的关键性因素,而品种真实性和纯度是种子质量的重要指标,对作物产量及品质具有直接的影响。随着品种数量的增多,田间表型农艺性状鉴定方法已难以满足快速、准确鉴定品种质量的需求。随着分子标记技术的发展,分子标记检测技术可以满足农业生产中不同条件下品种鉴定的需要。本研究以SSR标记技术为基础,结合种子监管工作实际,通过创新DNA快速提取方法、确定用于分子检测的核心SSR引物、明确电泳检测技术平台、确定棉花品种纯度和真实性鉴定方法建立一套简便、经济、准确而高效的棉花品种分子标记鉴定技术体系。该技术体系对保证棉花种子质量安全具有重要意义。主要研究结果如下:1、通过SSR引物多态性筛选确定了26对用于棉花品种分子检测的核心SSR引物。核心SSR引物覆盖棉花26条染色体,每对引物扩增的谱带带型数目最少为3种,最多11种,平均每对引物5.62种。2、通过比较变性PAGE和非变性PAGE两种银染检测方法,发现变性PAGE银染检测法能检测出分子标记位点真实的等位变异,而且条带清晰,结果可靠,适合用于对等位变异要求较高的检测分析如品种真实性鉴定、个体亲缘关系鉴定等;非... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

DNA溶解时间对PCR扩增产物的影响

图 2-2 快速提取 DNA 浓度对 PCR 扩增产物的影响Fig. 2-2 The influence of DNA sample concentration for PCR amplification products注：1-4 表示 DNA 样品稀释 20 倍；5-8 表示 DNA 样品稀释 30 倍；9-12 表示 DNA 样品稀释35 倍；13-16 表示 DNA 样品稀释 40 倍；17-20 表示 DNA 样品稀释 45 倍；21-24 表示 DNA样品稀释 50 倍；25-28 表示 DNA 样品稀释 80 倍；29-32 表示 DNA 样品稀释 100 倍。Note: No.1-4 represents the 20 times dilution DNA sample; No.5-8 represents the 30 timesdilution DNA sample; No.9-12 represents the 35 times dilution DNA sample; No.13-16represents the 40 times dilution DNA sample; No.17-20 represents the 45 times dilution DNAsample; No.21-24 represents the 50 times dilution DNA sample; No.25-28 represents the 80times dilution DNA sample; No.29-32 represents the 100 times dilution DNA sample;2.2 确定分子标记检测的核心 SSR 引物（1） SSR 核心引物的初步确定： 本研究所用的 SSR 引物源自

对 SSR 引物进行 PCR 扩增，通过 6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果(图 2-3)。依据带型清晰、扩增稳定、多态性丰富而且每条染色体确定 2 对引物的原则初步确定基本覆盖全部基因组的 52 对核心引物（表 2-3），这些 SSR 引物中有 18 对引物可以鉴定两种基因型，19 对引物可以鉴定三种基因型，8 对引物可以鉴定四种基因型，7 对引物可以鉴定五种以上的基因型。（2） SSR 核心引物的再确定：利用 96 个棉花品种对 52 对初步确定的 SSR 引物进行 PCR 扩增，通过 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析扩增结果。依据带型清晰、扩增稳定、等位变异丰富而且每条染色体确定 1 对引物的原则最终确定了代表全部基因组的 26 对核心引物（表 2-4）。


本文编号：3100552