丹参2,3-环氧鲨烯环化酶的克隆及功能研究

发布时间：2021-03-31 23:20

　　丹参（SalviamiltiorrhizaBunge）属于唇形科鼠尾草属植物,因其干燥的根和根茎中的活性成分而常被作为一种药用植物来研究,在医治心脑血管类疾病、抗氧化及抗肿瘤等问题上有显著疗效。现今研究人员大多关注于对丹参次生代谢中二萜类化合物丹参酮的研究,而对丹参中三萜类化合物的相关代谢研究甚少,但是丹参中也含有许多具有药用活性的三萜类化合物,所以对三萜类化合物代谢途径的解析还有待研究。本文在前期建立的丹参转录组数据库的基础上,对转录组进行深度挖掘,获得了一个2,3-环氧角鲨烯环化酶的unigene序列,进一步通过RACE技术得到2,3-环氧角鳘烯环化酶的cDNA全长序列,并对这条2,3-环氧角鲨烯环化酶进行克隆及功能鉴定。主要结果如下:1.从丹参中克隆得到了一个2,3-环氧角鲨烯环化酶基因SmOSC,全长为2298bp,编码765个氨基酸残基,经序列比对和进化树分析,推测这条基因可能在三萜类化合物的生物合成中编码2,3-环氧角鲨烯环化酶。进一步进行生物信息学分析,通过PSORT在线服务器对SmOSC进行了亚细胞定位分析,应用ExPASy Proteomics Server中Prot... 

【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１萜类化合物的生物合成途径［１４］??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ??

脂肪指数为２４．８９，亲水性平均值（ＧＲＡＶＹ）为０．８１８。利用ｐｒｅｄｉｃｔｐｒｏｔｅｉｎ在线预测基因??编码蛋白质的二级结构，使用生物学软件Ｓｗｉｓｓ－ｍｏｄｅｌ对其三维结构进行预测并建立模型??（图２－２），结果显示螺旋结构（Ｈｅｌｉｘ）占总氨基酸的４３．９８％，其他结构占５６．０２％。??－１５－??

?小在１６００?ｂｐ左右，通过ＰＣＲ扩增获得的ＳｗａＳＣ的ｃＤＮＡ全长在２３００?ｂｐ左右。??丨ＩＬ．Ｌ』??图２－ｉ５＞？ａｓｃ基因的获得??Ａ：細ＯＳＣ的ＶＲＡＣＥ的琼脂糖凝胶电泳图Ｂ：?ＳｍＯＳＣ全长ｃＤＮＡ扩增的琼脂糖凝胶电??泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳｍＯＳＣ?ｇｅｎｅ??Ａ：?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＳｍＯＳＣ?５，ＲＡＣＥ?Ｂ：?ＳｍＯＳＣ?Ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ?ｃＤＮＡ?ｂｙ?Ａｇａｒｏｓｅ??Ｇｅｌ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??２．原核表达筛选阳性单克隆，再经测序后获得其序列。将测序结果利用Ｖｅｃｔｏｒ?ＮＴＩ??软件进行拼接，对序列进行ＯＲＦ查找后得到完整的编码序列命名为办７〇ＳＣ，对其ｃＤＮＡ??序列进行预测分析，结果如下：??５ＶｗＯＳＣ基因经序列比对后，发现它的全长为２２９８?ｂｐ，一共编码７６５个氨基酸残基，??可能是一个皂苷三萜类环化酶基因。通过ＰＳＯＲＴ服务器亚细胞定位的分析，初步判断??ＳｍＯＳＣ蛋白定位在细胞核及细胞质中。通过ＥｘＰＡＳｙ?Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ?Ｓｅｒｖｅｒ的在线软件??Ｐｒｏｔｐａｒａｍ对蛋白的理化性质进行预测分析，分子量为１８．６３?ＫＤ，等电点Ｅ［为４．８７，消??光系数为３６１２５


本文编号：3112250