罗汉果鲨烯合酶分子结构和生物化学特征及表达研究
发布时间：2021-04-07 02:52
罗汉果学名Siraitia grosvenorii（Swingle）C.Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang,为主要分布于中国广西北部的葫芦科多年生草质藤本植物。罗汉果以果实入药,味甘性凉,归肺、大肠经,有润肺止咳,生津止渴的成效,适用于肺热或肺燥咳嗽,百日咳及暑热伤津口渴等,此外还有润肠通便的作用。罗汉果的主要药用成分为罗汉果苷化合物,其中罗汉果甜苷V是低热量、纯天然的甜味剂,还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、降血糖等作用。但罗汉果苷目前还不能化学合成,主要依靠从植物中提取获得,产量受到罗汉果种植环境及条件的制约。因此研究罗汉果苷生物合成途径关键酶的异源表达,可为提高罗汉果苷类在植物中生物合成产量,为利用植物基因工程、细胞工程工业化生产罗汉果苷奠定理论基础。其次对罗汉果鲨烯合酶结构的分析,研究影响酶活性的关键基团,促进罗汉果苷化合物的生物合成研究。第一章罗汉果鲨烯合酶基因的克隆及酶分子结构分析目的:克隆罗汉果鲨烯合酶基因,获完整的鲨烯合酶开放阅读框架序列,推衍出相应的氨基酸序列,利用生物信息学技术分析罗汉果鲨烯合酶的酶结构,研究鲨烯合酶蛋白中与酶活性相关的氨基酸位点。方法...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
罗汉果叶组织的总RNA电泳图
图 1-1 罗汉果叶组织的总 RNA 电泳图re 1-1 Electrophoresis results of the total RNA extracted from the leaf of Siraitia grosveR 扩增罗汉果鲨烯合酶基因片段及 cDNA 3′末端序列结果汉果鲨烯合酶基因片段扩增良好，无非物异性扩增，扩增产期结果相符（图 1-2A）。3′ race 第二轮 PCR 结果如图 1-2B，为与预期结果相符，无非物异性扩增。将扩增产物送上海生司测序，测序结果经 NCBI 上的 BLAST 比对之后证实获得罗基因序列。A B
igure 1-2 Electrophoresis results of amplicaton from SS gene of Siraitia grosvenoriiA. the fragment of SS gene amplicated by PCR; B. the results of 3′race罗汉果鲨烯合酶 cDNA 结果CR 扩增的罗汉果叶片鲨烯合酶基因 ORF 序列特异性扩增良好增不强，扩增产物长度在 1000 bp 与 2000 bp 之间，约 1200 b果一致（图 1-3A）。产物回收之后取 2μL 电泳，回收效率达接要求（图 1-3B）。与 pGEM-T Easy Vector 连接，转化大肠杆高（图 1-3C），随机挑取 5 个白色菌落进行的 PCR 检测均呈阳D）。送上海生物工程有限公司测序，测序结果如图 1-3A，经 NAST 比对（图 1-4B 和图 1-4C）之后证实获得罗汉果鲨烯合酶基。A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]佛手瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析[J]. 苏何玲,肖雅伦,谭燕莲,梁斌,谷云艳,刘永明,吴耀生. 安徽农业科学. 2016(32)
[2]甜瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析[J]. 黄海霞,苏何玲,史云龙,肖雅伦,谭燕莲,梁杨浩,刘永明,吴耀生. 广西植物. 2017(03)
[3]桑黄鲨烯环氧酶基因克隆与序列分析[J]. 孙婷婷,邹莉,张林芳,张国权,杨苑艺,李晶莹. 中草药. 2015(18)
[4]接骨草HMGR基因cDNA克隆、不同器官中的差异表达及生物信息学分析[J]. 姚元枝,黎晓英,郭文博,刘宇,魏麟. 中草药. 2015(16)
[5]三七鲨烯环氧酶基因（SE）启动子的瞬时表达分析[J]. 卢荣江,刘迪秋,葛锋,陈朝银. 植物生理学报. 2015(04)
[6]白花丹参鲨烯合酶SQS2的克隆与原核表达分析[J]. 荣齐仙,姜丹,查良平,申业,张燕,黄璐琦. 中国中药杂志. 2015(07)
[7]罗汉果实时荧光定量PCR内参基因的选择[J]. 涂冬萍,莫长明,马小军,赵欢,唐其,黄杰,潘丽梅,韦荣昌. 中国中药杂志. 2015(02)
[8]罗汉果SgHMGR基因的克隆、分析及原核表达[J]. 赵欢,莫长明,唐其,白隆华,马小军. 广西植物. 2015(06)
[9]基于转录组测序对油茶角鲨烯合酶基因的克隆及分析[J]. 周长富,姚小华,林萍,王开良,常君. 广西植物. 2013(06)
[10]铁皮石斛鲨烯合酶基因的克隆及其组织表达模式分析[J]. 张岗,唐志书,周莉英,刘清,李依民,张小飞,吕欣. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(09)
博士论文
[1]罗汉果转录组、表达谱的高通量测序及甜苷V生物合成关键酶的克隆[D]. 唐其.北京协和医学院 2010
硕士论文
[1]丹参酮生物合成相关基因的克隆及其代谢调控[D]. 廖攀.上海师范大学 2010
[2]环境因子对三萜含量影响的正交分析及羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因的克隆、分析[D]. 李娜.南京农业大学 2006
本文编号：3122651
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
罗汉果叶组织的总RNA电泳图
图 1-1 罗汉果叶组织的总 RNA 电泳图re 1-1 Electrophoresis results of the total RNA extracted from the leaf of Siraitia grosveR 扩增罗汉果鲨烯合酶基因片段及 cDNA 3′末端序列结果汉果鲨烯合酶基因片段扩增良好，无非物异性扩增，扩增产期结果相符（图 1-2A）。3′ race 第二轮 PCR 结果如图 1-2B，为与预期结果相符，无非物异性扩增。将扩增产物送上海生司测序，测序结果经 NCBI 上的 BLAST 比对之后证实获得罗基因序列。A B
igure 1-2 Electrophoresis results of amplicaton from SS gene of Siraitia grosvenoriiA. the fragment of SS gene amplicated by PCR; B. the results of 3′race罗汉果鲨烯合酶 cDNA 结果CR 扩增的罗汉果叶片鲨烯合酶基因 ORF 序列特异性扩增良好增不强，扩增产物长度在 1000 bp 与 2000 bp 之间，约 1200 b果一致（图 1-3A）。产物回收之后取 2μL 电泳，回收效率达接要求（图 1-3B）。与 pGEM-T Easy Vector 连接，转化大肠杆高（图 1-3C），随机挑取 5 个白色菌落进行的 PCR 检测均呈阳D）。送上海生物工程有限公司测序，测序结果如图 1-3A，经 NAST 比对（图 1-4B 和图 1-4C）之后证实获得罗汉果鲨烯合酶基。A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]佛手瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析[J]. 苏何玲,肖雅伦,谭燕莲,梁斌,谷云艳,刘永明,吴耀生. 安徽农业科学. 2016(32)
[2]甜瓜鲨烯合酶基因克隆及酶分子结构分析[J]. 黄海霞,苏何玲,史云龙,肖雅伦,谭燕莲,梁杨浩,刘永明,吴耀生. 广西植物. 2017(03)
[3]桑黄鲨烯环氧酶基因克隆与序列分析[J]. 孙婷婷,邹莉,张林芳,张国权,杨苑艺,李晶莹. 中草药. 2015(18)
[4]接骨草HMGR基因cDNA克隆、不同器官中的差异表达及生物信息学分析[J]. 姚元枝,黎晓英,郭文博,刘宇,魏麟. 中草药. 2015(16)
[5]三七鲨烯环氧酶基因（SE）启动子的瞬时表达分析[J]. 卢荣江,刘迪秋,葛锋,陈朝银. 植物生理学报. 2015(04)
[6]白花丹参鲨烯合酶SQS2的克隆与原核表达分析[J]. 荣齐仙,姜丹,查良平,申业,张燕,黄璐琦. 中国中药杂志. 2015(07)
[7]罗汉果实时荧光定量PCR内参基因的选择[J]. 涂冬萍,莫长明,马小军,赵欢,唐其,黄杰,潘丽梅,韦荣昌. 中国中药杂志. 2015(02)
[8]罗汉果SgHMGR基因的克隆、分析及原核表达[J]. 赵欢,莫长明,唐其,白隆华,马小军. 广西植物. 2015(06)
[9]基于转录组测序对油茶角鲨烯合酶基因的克隆及分析[J]. 周长富,姚小华,林萍,王开良,常君. 广西植物. 2013(06)
[10]铁皮石斛鲨烯合酶基因的克隆及其组织表达模式分析[J]. 张岗,唐志书,周莉英,刘清,李依民,张小飞,吕欣. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(09)
博士论文
[1]罗汉果转录组、表达谱的高通量测序及甜苷V生物合成关键酶的克隆[D]. 唐其.北京协和医学院 2010
硕士论文
[1]丹参酮生物合成相关基因的克隆及其代谢调控[D]. 廖攀.上海师范大学 2010
[2]环境因子对三萜含量影响的正交分析及羟甲基戊二酰辅酶A还原酶基因的克隆、分析[D]. 李娜.南京农业大学 2006
本文编号：3122651
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