Amy32B启动子在水稻中的表达分析

发布时间：2021-04-07 09:34

　　根据已报道的在大麦糊粉层特异表达的α-淀粉酶基因Amy32B,利用序列合成技术将Amy32B启动子与红色荧光蛋白基因RFP融合在一起,构建植物表达载体,并由农杆菌介导法导入水稻品种明恢86中,对转基因水稻植株中的红色荧光蛋白RFP活性进行检测。结果表明,Amy32B启动子在水稻中同样具有活性,在糊粉层背部特异表达,在整个植株中也有微弱本底表达。这表明Amy32B启动子为外源基因在转基因水稻糊粉层中高表达提供了新的工具,也为研究基因工程改良水稻提供了新的参考。 

【文章来源】：杂交水稻. 2020,35(04)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

表达载体pCAMBIA3301-pAmy32B的核心序列

分别从10个阳性转基因植株和对照组中各随机挑选3个单株，取其蜡熟期的根、茎、叶片、枝梗和种子在荧光体视显微镜下进行观察。在所取的3个阳性转基因单株的种子糊粉层背侧观察到红色荧光信号，而在阴性对照组中均没有红色荧光信号，同时在阳性转基因单株的根、茎、叶片和枝梗中也检测到了微弱的荧光信号，如图4、图5所示。3 讨论

Amy32B基因由Whittier等[10]克隆鉴定，它编码1个低PI同工酶，在赤霉素和脱落酸的控制下在大麦糊粉层细胞中表达，Amy32B启动子全长1.4 kb，含有核心启动子元件TATA-box以及受赤霉素调控的GARE和脱落酸调控的ABRE。为探究Amy32B启动子在水稻中的表达情况，本研究选取Amy32B基因翻译起始位点ATG前长度为688 bp的序列作为Amy32B启动子驱动红色荧光蛋白RFP，在转基因水稻植株中检测到了红色荧光信号，说明实验所选取的Amy32B启动子具有转录活性。在进行启动子活性分析的研究时通常选用报告基因来检测，报告基因可实时定量检测细胞活动和生理化学物质的变化情况，目前常用的报告基因主要有荧光素酶基因luc[15]和β-葡萄糖苷酶基因gus[16]2类，其中检测荧光素酶基因表达时需要向材料内渗入荧光素，而对β-葡萄糖苷酶基因组织化学检测时，则需要反应底物4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷酸X-Gluc参与，该反应底物价格昂贵，并且这2种检测方法对植物材料都有破坏性。本实验选取的是克隆于珊瑚中的红色荧光蛋白RFP，其相对分子量小，荧光稳定，不需要外源底物或辅助因子的报告基因，可直接通过荧光显微镜来检测其活性，十分简单快速。图4 Amy32B阳性转基因水稻种子红色荧光信号检测

【参考文献】：
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本文编号：3123253