梧州药用野生稻内生菌多样性及其耐镉特性研究

发布时间：2021-04-18 05:20

　　植物内生细菌由于其对宿主植物的促生长和协助宿主植物拮抗生物或非生物逆境的作用,已经受到广泛研究。其主要的研究是新种挖掘、微生物肥料开发以及新药研发等方面。而重金属镉污染日益严重,严重影响了人类的日常生活和生产。挖掘药用野生稻内生细菌多样性,探索内生细菌对重金属镉胁迫的耐受性,利用耐镉内生菌降低水污染中的镉含量,此也已经逐步成为当前环境治理的热点。本研究以广西梧州药用野生稻为试验材料,采用多种培养基进行内生细菌的分离纯化。运用随机插入序列指纹图谱（IS-PCR指纹图）对所分离得到内生菌聚类,测定类群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析内生菌进化系统发育。测定各类群菌株的生理生化特性,得到具有较强促生长特性内生菌;以及筛选具有耐镉能力菌株,应用于不同浓度镉样液,分析其耐镉以及降镉能力。本研究以广西梧州药用野生稻为试验材料,采用多种培养基进行内生细菌的分离纯化,得到162株内生细菌;并运用随机插入序列指纹图对所分离得到内生菌聚类,共分为19个类群。测定各类群代表菌株16S rRNA基因序列,并分析内生菌进化系统发育,分离得到内生菌属于Kosakonia sacchari、Kosakoni... 

【文章来源】：华南农业大学广东省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 内生细菌概述
    1.2 内生细菌分类方法
        1.2.1 经典分类方法（传统分类法）
        1.2.2 数值分类法
        1.2.3 化学分类法
        1.2.4 遗传学分类法
    1.3 内生菌对宿主植物的促生作用
        1.3.1 生物固氮作用
        1.3.2 溶磷解钾
        1.3.3 铁的利用
        1.3.4 分泌生长素类植物激素
    1.4 镉污染概况及其危害
    1.5 降镉方法
    1.6 论文研究目的与意义
    1.7 技术路线
2 材料与方法
    2.1 内生菌的分离纯化
        2.1.1 材料
        2.1.2 培养基
        2.1.3 菌株分离纯化
        2.1.4 菌株形态学鉴定
            2.1.4.1 实验所需试剂（石碳酸碱性复红染液）
            2.1.4.2 菌种的准备
            2.1.4.3 形态学观察
        2.1.5 菌株保存
        2.1.6 IS-PCR指纹图谱聚类分析
    2.2 菌株系统发育分析
        2.2.1 16S rRNA基因扩增
            2.2.1.1 菌株DNA的提取
            2.2.1.2 16S rRNA基因扩增
        2.2.2 16S rRNA基因测序与同源性分析
    2.3 菌株生理生化测定
        2.3.1 代表菌株生理代谢指标测定
        2.3.2 菌株生理功能特性鉴定
    2.4 代表类群供试菌株固氮能力测定
        2.4.1 细菌固氮酶活性测定
        2.4.2 nifH基因的扩增
    2.5 耐镉菌株筛选与鉴定
        2.5.1 耐镉菌株初筛
        2.5.2 可能具耐镉菌株耐镉能力测定
        2.5.3 耐镉菌株对不同碳源利用情况
        2.5.4 耐镉菌株对不同抗生素、NaCl浓度和pH耐受性
            2.5.4.1 pH值生长范围测定
            2.5.4.2 耐盐特性测定
            2.5.4.3 抗生素抗性鉴定
        2.5.5 耐镉菌株巯基含量测定
            2.5.5.1 试剂配制
            2.5.5.2 BSA（牛血清白蛋白）标准曲线制作
            2.5.5.3 Bradford法蛋白含量测定
            2.5.5.4 Ellman法测定巯基含量测定
3 结果与分析
    3.1 内生菌的分离与纯化
    3.2 内生菌的聚类分析
    3.3 各类代表菌株16S rRNA基因序列相似性分析
    3.4 各类代表菌株16S rRNA基因序列相似性分析
    3.5 生理生化特性测定
        3.5.1 各代表类群菌株生理生化特性测定
        3.5.2 固氮特性鉴定
            3.5.2.1 固氮酶活性测定
            3.5.2.2 nifH基因扩增
    3.6 内生菌耐镉特性测定
        3.6.1 耐镉初筛
        3.6.2 耐镉定量测定
        3.6.3 耐镉菌株对不同碳源利用情况
        3.6.4 耐镉菌株对不同抗生素、NaCl浓度和pH耐受性
        3.6.5 耐镉菌巯基含量测定
4 讨论与结论
    4.1 梧县药用野生稻内生菌多样性
    4.2 内生菌的促生特性分析
    4.3 内生细菌耐镉特性
致谢
参考文献
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]藤县药用野生稻内生固氮菌分离鉴定及系统发育分析[J]. 胡文哲,谭泽文,王勇,徐羡微,谭志远.  生物技术通报. 2016(06)
[2]小麦全蚀病菌拮抗菌Bacillus methylotrophicusZ-9菌株产芽孢条件优化[J]. 孔少元,吕纪涛,张冬冬,王世英.  河南农业科学. 2016(01)
[3]广西药用野生稻内生细菌多样性及促生作用[J]. 阳洁,秦莹溪,王晓甜,尹坤,江院,袁涛,谭志远.  生态学杂志. 2015(11)
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[5]岑溪药用野生稻高效内生固氮菌分离及促生特性[J]. 尹坤,阳洁,顾文杰,袁涛,谭志远.  微生物学通报. 2015(08)
[6]石油降解菌的分子鉴定及降解能力研究[J]. 张国霞,关颖,蒋云霞,邹飞,周宏伟.  生态科学. 2015(02)
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[8]烟草青枯病拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抑菌活性初探[J]. 刘伟,刘鹏,沈小英,安天赐,成巨龙,安德荣.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(02)
[9]番茄灰霉病拮抗芽孢杆菌LW-6-1的筛选、鉴定及抑菌活性研究[J]. 刘伟,宋双,沈小英,安天赐,牛小义,安德荣.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(11)
[10]青香茅和五节芒内生固氮菌的分离与生理生化鉴定[J]. 谭志远,傅琴梅,彭桂香,原红娟,程艳波,江院.  应用与环境生物学报. 2013(04)

博士论文
[1]新疆阿克苏盐矿嗜盐微生物多相分类和基因组研究[D]. 张为艳.浙江大学 2015
[2]除草剂异丙隆降解菌株的筛选鉴定及降解特性和应用研究[D]. 孙纪全.南京农业大学 2008

硕士论文
[1]深部地下新种微生物分类学研究[D]. 滕阅文.北京化工大学 2015
[2]新疆几种典型荒漠植物根际微生物特征及内生固氮菌的分离、促生性能研究[D]. 王卫霞.新疆农业大学 2009
[3]细胞分裂素与巨大芽孢杆菌B1301抑菌能力及其防治小麦纹枯病的关系[D]. 齐勇.山东农业大学 2007
[4]利用地衣芽孢杆菌发酵生产细胞分裂素[D]. 刘伟.华中农业大学 2005



本文编号：3144887