过表达OsMPK17激酶蛋白质增强了水稻的耐旱性

发布时间：2021-04-18 15:03

　　促分裂原活化蛋白质激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）在真核生物中高度保守,在水稻逆境应答反应中也发挥着重要作用。本研究表达纯化了水稻OsMPK17蛋白质,制备了特异性抗体,对多种非生物逆境胁迫下的蛋白质样品进行免疫印迹分析,发现OsMPK17蛋白质在干旱胁迫下诱导表达,提示该蛋白质在干旱胁迫应答中发挥作用。对脱落酸和茉莉酸甲酯处理的离体叶片蛋白质分析发现,OsMPK17蛋白质表达丰度下降,提示该蛋白质的功能发挥可能受激素调控。为此,构建了过表达OsMPK17蛋白质的载体,转化水稻后筛选获得了OsMPK17蛋白质过表达的纯合株系。田间种植鉴定结果表明,转基因株系的株高变矮、穗长变短、结实率降低。种子萌发期拟旱（PEG-6000）处理条件下,过表达OsMPK17株系的种子长势明显比野生型好,根长与芽长均显著大于野生型。幼苗期失水试验表明,转基因植株的失水率低于野生型。在土培干旱胁迫后恢复浇水的试验中,过表达OsMPK17蛋白质的转基因水稻生长也好于野生型。综上,过表达OsMPK17蛋白质提高了水稻的耐旱性。本研究增进了对水稻OsMPK17基... 

【文章来源】：作物学报. 2020,46(01)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

水稻OsMPK17基因的克隆与融合蛋白质表达

设计PCR引物,以cDNA质粒为模板,扩增获得了全长的OsMPK17基因(图3-A),双酶切后装入pEASY-3HA中间载体,测序验证后,用内切酶Hind III和Xba I切下片段,电泳检测到1848 bp的插入片段(图3-B),装入水稻转化质粒pUBI-C4300中,获得了pUBI-C4300-MPK17转化载体,经Kpn I和Sac I酶切检测到符合预期的插入片段(图3-C),证明获得了正确的过表达载体。2.4 水稻转化及阳性植株的鉴定

为了进一步鉴定转基因水稻的耐旱性,将2个转基因株系(A202和A212)与野生型对照进行同盆栽培,以便使培养条件尽量保持一致,种子发芽后正常盆栽培养5 d,停止浇水,花盆土壤自然干燥,使水稻幼苗承受实际的干旱胁迫,经不同天数的干旱胁迫后,待部分植株出现萎蔫并呈现叶片有50%干枯时,恢复浇水并观察水稻苗的生长状况(图8)。转基因苗(右侧)在胁迫处理时和恢复浇水后都表现比野生型水稻苗(左侧)有更多的绿色部分,说明转基因苗具有较强的耐旱性。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3145682