转化体叠加的转基因棉花cry1Ac基因表达及启动子甲基化分析
发布时间：2021-07-30 17:01
转Bt抗虫棉是我国种植面积最大的转基因作物,在我国已有20年种植历史。外源基因表达稳定性一直是转基因遗传分析和分子特征评价的重要内容,为了深入研究转Bt抗虫棉外源基因表达稳定性,本研究以保铃棉中的MON531转化体（MON531）、7S非功能插入（简称7S）,以及与MON531相同载体的MON757转化体（MON757）为研究材料,分析了单个转化体插入和复合转化体插入在外源杀虫蛋白表达、mRNA转录和启动子甲基化水平上的差异,主要研究结果如下:1.以棉花基因组与插入序列的连接区为靶标,建立7S的定性、定量PCR检测方法。利用建立的方法分析了2014年我国湖北省市售的48份转基因棉花种子,有8份检测到7S非功能插入,定量PCR检测表明,其含量介于0.46%-34.39%。进一步跟踪检测表明,保铃棉531中7S非功能插入与抗虫功能性插入在遗传上不连锁。2.利用ELISA方法测定MON531、MON757、7S及其复合转化体Cry1Ac蛋白表达情况。对3个市场棉种材料研究表明,7S非功能插入不影响MON531中Cry1Ac蛋白表达;对具有相同遗传背景的纯合MON531、MON757及其复合转...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
引物、探针设计图
.2 我国棉花种子中 7S 非功能插入的定性检测分析运用 7S 非功能插入定性 PCR 检测方法对 2014 年湖北省种子市场购买的鄂杂棉品种进行鉴定，结果表明湘沃棉 C35F1、湘杂棉 13 号 F1、渝杂 2 号 F1、钼杂F1、创杂棉 21 号、鄂杂棉 26 号 F1 等 7 个材料检测到 7S 非功能插入序列。随机 S-26F1、创杂棉 21 号)，分别对其 60 单粒进行鉴定，两转基因棉花品种各检出 7S 非功能插入的种子（图 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112图 2-3. 7S 非功能插入定性 PCRA: 100% B: 10% C:1% DE: 0.05% F: 0% M: DL2000 Figure 2-3. Sensitivity test of qualA: 100% B:10% C:1% E: 0.05% F: 0% M: DL2000 图 2-2. 定性 PCR 特异性测定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 阳性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker
2.2.2 我国棉花种子中 7S 非功能插入的定性检测分析运用 7S 非功能插入定性 PCR 检测方法对 2014 年湖北省种子市场购买的鄂杂棉 26 号 F148 个品种进行鉴定，结果表明湘沃棉 C35F1、湘杂棉 13 号 F1、渝杂 2 号 F1、钼杂 411F1、S-26F1、创杂棉 21 号、鄂杂棉 26 号 F1 等 7 个材料检测到 7S 非功能插入序列。随机抽取两个种(湘 S-26F1、创杂棉 21 号)，分别对其 60 单粒进行鉴定，两转基因棉花品种各检出 1 粒和 2含有 7S 非功能插入的种子（图 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112图 2-3. 7S 非功能插入定性 PCR 灵敏度测试A: 100% B: 10% C:1% D: 0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 MarkerFigure 2-3. Sensitivity test of qualitative PCRA: 100% B:10% C:1% D:0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 Marker图 2-2. 定性 PCR 特异性测定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 阳性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究[J]. 柴帅杰,武鹏程,荣瑞娟,郝育杰,史佳楠,郭亚璐,丁国涛,韩宇宁,赵志静,魏健,尹长城,刘国振. 核农学报. 2017(01)
[2]复合性状转基因棉花杀虫蛋白表达量及对4种鳞翅目害虫的抗性[J]. 许冬,郭建明,丛胜波,武怀恒,黄民松,王强,万鹏. 棉花学报. 2016(05)
[3]转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用[J]. 杨阳,王叶,范金杰,谢家建,彭于发. 农业生物技术学报. 2016(06)
[4]复合性状转基因水稻T1c-19向受体水稻及杂草稻的基因漂移[J]. 黄鹞,李继坤,强胜,骆天鹏,宋小玲. 应用与环境生物学报. 2015(06)
[5]中国转基因棉花研发应用二十年[J]. 郭三堆,王远,孙国清,金石桥,周焘,孟志刚,张锐. 中国农业科学. 2015(17)
[6]广谱抗病基因chi和hrpZpsta双价表达载体的构建及其在大豆中的遗传转化[J]. 卢实,王丕武,曲静,马建,张卓,吴楠,才源. 大豆科学. 2015(01)
[7]实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测转基因成分的数据分析及其标准化研究[J]. 张丽,曹应龙,王海英,梁晓声,卢长明. 农业生物技术学报. 2015(01)
[8]棉花规模化转基因技术体系构建及其应用[J]. 刘传亮,田瑞平,孔德培,李凤莲,商海红,陈秀军. 中国农业科学. 2014(21)
[9]全球复合性状转基因作物监管制度的比较分析[J]. 朱鹏宇,黄昆仑,商颖,许文涛. 食品安全质量检测学报. 2014(08)
[10]转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征[J]. 牛东东,郝育杰,荣瑞娟,韦汉福,兰金苹,史佳楠,魏健,李雪姣,杨烁,奚文辉,武鹏程,刘丽娟,吴琳,刘斯奇,尹长城,刘国振. 中国农业科学. 2014(14)
博士论文
[1]转基因抗病虫与高赖氨酸水稻的改良研究[D]. 刘鑫.浙江大学 2016
[2]双价Bt抗虫水稻的培育和转基因水稻回交效应分析[D]. 杨宙.华中农业大学 2011
硕士论文
[1]转基因棉花MON757转化体的检测和外源基因表达的初步分析[D]. 杨阳.中国农业科学院 2016
[2]抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的转基因复合性状玉米种质的创制[D]. 孙越.山东大学 2014
[3]应用ELISA检测转基因棉花中Bt蛋白的研究[D]. 郭艾英.天津科技大学 2006
本文编号：3311788
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
引物、探针设计图
.2 我国棉花种子中 7S 非功能插入的定性检测分析运用 7S 非功能插入定性 PCR 检测方法对 2014 年湖北省种子市场购买的鄂杂棉品种进行鉴定，结果表明湘沃棉 C35F1、湘杂棉 13 号 F1、渝杂 2 号 F1、钼杂F1、创杂棉 21 号、鄂杂棉 26 号 F1 等 7 个材料检测到 7S 非功能插入序列。随机 S-26F1、创杂棉 21 号)，分别对其 60 单粒进行鉴定，两转基因棉花品种各检出 7S 非功能插入的种子（图 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112图 2-3. 7S 非功能插入定性 PCRA: 100% B: 10% C:1% DE: 0.05% F: 0% M: DL2000 Figure 2-3. Sensitivity test of qualA: 100% B:10% C:1% E: 0.05% F: 0% M: DL2000 图 2-2. 定性 PCR 特异性测定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 阳性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker
2.2.2 我国棉花种子中 7S 非功能插入的定性检测分析运用 7S 非功能插入定性 PCR 检测方法对 2014 年湖北省种子市场购买的鄂杂棉 26 号 F148 个品种进行鉴定，结果表明湘沃棉 C35F1、湘杂棉 13 号 F1、渝杂 2 号 F1、钼杂 411F1、S-26F1、创杂棉 21 号、鄂杂棉 26 号 F1 等 7 个材料检测到 7S 非功能插入序列。随机抽取两个种(湘 S-26F1、创杂棉 21 号)，分别对其 60 单粒进行鉴定，两转基因棉花品种各检出 1 粒和 2含有 7S 非功能插入的种子（图 2-4）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112图 2-3. 7S 非功能插入定性 PCR 灵敏度测试A: 100% B: 10% C:1% D: 0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 MarkerFigure 2-3. Sensitivity test of qualitative PCRA: 100% B:10% C:1% D:0.1%E: 0.05% F: 0% M: DL2000 Marker图 2-2. 定性 PCR 特异性测定1: 棉花 2: 大豆 3: 甜菜 4: 油菜 5: 玉米 6: 水稻7: 苜蓿 8: 木瓜 9: MON531 10: 空白 11: 阳性 12:DL2000 MarkerFigure 2-2. Specificity identification of qualitative PCR1: Cotton 2: Soybean 3: Beet 4: Rape 5: Maize 6: Rice 7:Alfalfa 8: Papaya 9: MON531 10: Blank 11: Positive12: DL2000 Marker
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究[J]. 柴帅杰,武鹏程,荣瑞娟,郝育杰,史佳楠,郭亚璐,丁国涛,韩宇宁,赵志静,魏健,尹长城,刘国振. 核农学报. 2017(01)
[2]复合性状转基因棉花杀虫蛋白表达量及对4种鳞翅目害虫的抗性[J]. 许冬,郭建明,丛胜波,武怀恒,黄民松,王强,万鹏. 棉花学报. 2016(05)
[3]转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用[J]. 杨阳,王叶,范金杰,谢家建,彭于发. 农业生物技术学报. 2016(06)
[4]复合性状转基因水稻T1c-19向受体水稻及杂草稻的基因漂移[J]. 黄鹞,李继坤,强胜,骆天鹏,宋小玲. 应用与环境生物学报. 2015(06)
[5]中国转基因棉花研发应用二十年[J]. 郭三堆,王远,孙国清,金石桥,周焘,孟志刚,张锐. 中国农业科学. 2015(17)
[6]广谱抗病基因chi和hrpZpsta双价表达载体的构建及其在大豆中的遗传转化[J]. 卢实,王丕武,曲静,马建,张卓,吴楠,才源. 大豆科学. 2015(01)
[7]实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测转基因成分的数据分析及其标准化研究[J]. 张丽,曹应龙,王海英,梁晓声,卢长明. 农业生物技术学报. 2015(01)
[8]棉花规模化转基因技术体系构建及其应用[J]. 刘传亮,田瑞平,孔德培,李凤莲,商海红,陈秀军. 中国农业科学. 2014(21)
[9]全球复合性状转基因作物监管制度的比较分析[J]. 朱鹏宇,黄昆仑,商颖,许文涛. 食品安全质量检测学报. 2014(08)
[10]转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征[J]. 牛东东,郝育杰,荣瑞娟,韦汉福,兰金苹,史佳楠,魏健,李雪姣,杨烁,奚文辉,武鹏程,刘丽娟,吴琳,刘斯奇,尹长城,刘国振. 中国农业科学. 2014(14)
博士论文
[1]转基因抗病虫与高赖氨酸水稻的改良研究[D]. 刘鑫.浙江大学 2016
[2]双价Bt抗虫水稻的培育和转基因水稻回交效应分析[D]. 杨宙.华中农业大学 2011
硕士论文
[1]转基因棉花MON757转化体的检测和外源基因表达的初步分析[D]. 杨阳.中国农业科学院 2016
[2]抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的转基因复合性状玉米种质的创制[D]. 孙越.山东大学 2014
[3]应用ELISA检测转基因棉花中Bt蛋白的研究[D]. 郭艾英.天津科技大学 2006
本文编号：3311788
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