CsPPT基因的表达分析及其对茶叶品质的影响

发布时间：2021-08-27 16:29

　　茶树（Camellia sinensis）的栽培在我国已经有3000多年的历史,茶树种质资源相当丰富;不同品种的茶树具有不同的适制性,在这其中茶叶内含成分起了关键作用。与茶树品质形成相关的成分主要有茶多酚、氨基酸和咖啡碱,而’酚氨比’也经常用作评价茶树品质的重要指标。在茶树的多酚和氨基酸合成途径中,磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）扮演着重要角色,茶树中PEP进入叶绿体可作为儿茶素等次生代谢物的原料,而在细胞液中进入三羧酸循环可合成茶氨酸,因此将PEP转运进入叶绿体的PPT转运子功能对茶树品质形成具有重要作用。本研究从磷酸烯醇式丙酮酸转运子（CsPPT2）基因的克隆入手,与课题组早期研究的基因CsPPT1进行比较分析,结合两个基因在不同组织、不同时期、不同叶色茶树品种的不同时期的表达量分析2个基因与茶树品质形成的关系。具体研究结果如下:（1）以茶树（Camellia sinensis）’白叶1号’为材料,应用RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子家族一个基因CsPPT2的cDNA序列,CsPPT2的cDNA全长1469bp,其中开放阅读框（ORF）为1218bp,编码40... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１茶树基因的克隆??Ｆｉｐ?２－１?Ａｍｎｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２?ｐｅｎｅ?ｆｒｏｍ?Ｃ．ｏｍｅｌｌｉｎ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ??２２??

Ｆｉｇ．２－４?Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ?ｓｉｇｎａｌ?ｐｅｐｔｉｄｅ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２??２．２．２．６茶树基因跨膜区域结构预测??采用ＴＭＨＭＭ分析发现，ＧＰＰｒ２共有６个跨膜结构域（图２－６），预测位置分??别在?１０５－１２２、１３２－１５４、１６７－１８９、２２７－２４９、２７９－３０１、３７２－３９４。推测该蛋白可能为跨??膜蛋白。茶树蛋白氨基酸Ｎ端和Ｃ端均处于细胞膜内部。与ＣｓＰ／Ｔ／不同的??是，Ｃ？斤７７有７个跨膜区域。??２．２．２．７茶树Ｏ■尸／Ｔ２基因亚细胞定位预测??利用ＴａｒｇｅｔＰ?１．１?Ｓｅｒｖｅｒ在线软件预测０斤７２蛋白的亚细胞定位情况如表２－２。??显示叶绿体转运肽定位的可能性最大，得分为０．９８６，而作为线粒体粑向肽和信号肽??定位的可能性很小，得分仅为０．０２１和０．００３。??表２－２?Ｃ＾Ｐ７２的亚细胞定位的预测??Ｔａｂｌｅ?２?Ｔｈｅ?Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｓＰＰＴ２??Ｎａｍｅ?Ｌｅｎｇｔｈ?ｃＴＰ?ｍＴＰ?ＳＰ?Ｏｔｈｅｒ?Ｌｏｃ?ＲＣ???ＣｓＰＰＴ２?４０６＂?０．９８６?０．０２１?０．００３?０．４２?Ｃ?１?￣??２６??

９５?°Ｃ?５?ｓ?］＿?４０?个循环??６０?°Ｃ?３０?ｓ?？??６５?°Ｃ?１０?ｓ?６１个循环??利用ｉＱ？５Ｓ〇ｆｔｗａｒｅ进行熔解曲线分析，相对表达差异为２＿＾ＣＴ，ＡＣＴ＝ＣＴ，目??的基因－ＣＴ神細［７９１。每一个样品做三个生物学重复，利用统计学软件ＳＰＳＳ?１７．０对数??据进行差异显著性分析。??３．２实验结果与分析??３＿２．１不同茶树品种ＣＳＰＰ７７和Ｃ？ＰＰ：Ｔ２基因的克隆??以茶树一芽二叶ｃＤＮＡ为模板和己设计好的ＯＦＲ框的引物（表２－１）克隆ＣｓＰＰ７７??和ＣＳＰ／Ｔ２，获得不同品的种Ｃ＾／Ｔ／和（＾７＾７７均约１２００?ｂｐ的片段。测序并结合??ＢｉｏＸＭ?２．６分析发现五个品种的ＣｓＰＰＴＶ该基因完整ＯＲＦ长度为１２２７?ｂｐ，编码４０８??个氨基酸，基因完整ＯＲＦ长度为１２１８?ｂｐ，编码４０６个氨基酸（图３－１）。??

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]PPT1基因调控植物生长发育的研究及叶脉特异表达增强子的分离应用[D]. 吴学龙.浙江大学 2013

硕士论文
[1]一个水稻白苗复绿性状的遗传特性和基因定位研究[D]. 杨洁.华中农业大学 2008



本文编号：3366698