甘薯块根发育及非生物胁迫相关MADS-box基因的筛
发布时间：2021-08-31 05:21
甘薯（Ipomoea batatas）是世界上重要的粮食、饲料、蔬菜、工业原料和新型能源作物。提高甘薯产量已成为当前甘薯育种的主要方向之一。MADS-box蛋白是一类重要的转录因子,在植物生长发育及抗逆等过程发挥着重要功能。我们利用转录组数据及甘薯近缘野生种I.trifida全基因组数据在甘薯（Xu22）中筛选并克隆到8个MADS-box基因;利用实时定量RT-PCR对其在甘薯各组织的表达特性进行了分析;对甘薯幼苗进行了非生物胁迫和激素处理,利用实时定量RT-PCR分析了8个MADS-box基因对非生物胁迫和激素的响应,筛选到一个可能与甘薯块根发育和抗逆相关的MADS-box基因Ib MBP4,利用农杆菌转化法在番茄中异源超表达了该基因,初步分析了Ib MBP4的功能。主要研究结果如下:（1）通过转录组数据及I.trifida全基因组数据库筛选到8个MADS-box基因,以甘薯栽培种徐薯22叶、茎、根混合c DNA为模板,克隆了8个MADS-box基因。（2）通过生物信息学分析了8个MADS-box蛋白的基本理化性质。对各MADS-box基因进行了亚细胞定位预测,发现这8个基因都定位于...
【文章来源】：江苏师范大学江苏省
【文章页数】：127 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甘薯各组织总RNA电泳图
江苏师范大学硕士学位论文20表2-4各组织RNA的浓度测定Table2-4DeterminationoftheconcentrationofRNAsineachtissue材料名称（中文）英文缩写浓度（ng/μL）260/280叶L937.81.99茎S541.61.84纤维根FR640.31.88发育根1DR1322.11.89发育根2DR2307.41.86成熟根MR370.11.92从以上结果我们可以看出，所提取RNA的质量良好，28S和18S条带较亮，5s条带明显，且亮度较弱，并且浓度较高，可用于后续反转录实验。2.3.2MADS-box基因的扩增根据已有的转录组数据，结合公布的I.trifida全基因组数据库，应用引物设计软件PrimerPremier5，设计得到8对MADS-box引物，以之前反转录所得徐22各组织（叶、茎、纤维根、发育根初期、发育根后期和成熟块根）混合cDNA为模板，分别对8个MADS-box基因进行了克拢如图2-2、2-3和2-4所示，所扩增条带大小与理论片段长度一致（IbMBP1：450bp，IbMBP2：666bp，IbMBP4：1036bp，IbMBP5：774bp，IbMBP6：648bp，IbMBP7：696bp，IbMBP8：636bp，IbMBP10：597bp），可以用于后续实验。图2-2MADS-box基因PCR电泳图Figure2-2ThePCRelectrophoresisofMADS-boxgenesM:DL2000Marker，1：IbMBP1，2：IbMBP2，3：IbMBP6，4：IbMBP7，5：IbMBP8，6：IbMBP10M:DL2000Marker,1:IbMBP1,2:IbMBP2,3:IbMBP6,4:IbMBP7,5:IbMBP8,6:IbMBP10
第二章甘薯MADS-box基因的筛选及克隆21图2-3IbMBP4基因PCR电泳图Figure2-3ThePCRelectrophoresisofIbMBP4geneM:DL2000Marker，1~5：IbMBP4基因M:DL2000Marker,1~5:IbMBP4gene图2-4IbMBP5基因PCR电泳图Figure2-4ThePCRelectrophoresisofIbMBP5geneM:DL2000Marker，1：IbMBP5基因M:DL2000Marker,1:IbMBP5gene2.3.3阳性单克隆的筛选将PCR所得条带经过纯化加A尾后，与克隆载体pMD19-T连接，转入大肠杆菌感受态细胞后，利用菌落PCR对长出的单菌落进行阳性鉴定。如图2-5至2-11所示，筛选获得7个IbMBP1阳性克垄7个IbMBP2阳性克垄10个IbMBP4阳性克垄8个IbMBP5阳性克垄3个IbMBP6阳性克垄6个IbMBP7阳性克垄7个IbMBP8阳性克隆和8个IbMBP10阳性克拢图2-5IbMBP1基因菌落PCRFigure2-5ThebacteriaPCRofIbMBP1geneM:DL2000Marker，1~7：七个IbMBP1阳性克隆M:DL2000Marker,1~7:sevenIbMBP1positiveclones
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘薯种植对苏北沿海滩涂土壤环境的影响[J]. 刘冲,王茂文,邢锦城,丁海荣,朱小梅,赵宝泉,董静,温祝桂,洪立洲. 浙江农业学报. 2016(11)
[2]甘薯抗旱鉴定及生理响应研究[J]. 刘恩良,曹清河,唐君,金平. 新疆农业科学. 2016(06)
[3]我国薯类基础研究的动态与展望[J]. 张鹏. 生物技术通报. 2015(04)
[4]甘薯耐非生物胁迫的分子生物学研究进展[J]. 王福琴,侯夫云,秦桢,李爱贤,董顺旭,王庆美,张立明. 基因组学与应用生物学. 2015(01)
[5]甘薯块根生长及其淀粉体发育过程的解剖结构特征[J]. 荆彦平,李栋梁,刘大同,余徐润,胡慕兰,顾蕴洁,王忠. 西北植物学报. 2013(12)
[6]国内外甘薯产业发展概况[J]. 马剑凤,程金花,汪洁,戴红君,戴起伟. 江苏农业科学. 2012(12)
[7]中国甘薯产业及产业技术的发展与展望[J]. 马代夫,李强,曹清河,钮福祥,谢逸萍,唐君,李洪民. 江苏农业学报. 2012(05)
[8]不同类型甘薯品种主要经济性状和营养成分差异[J]. 刘桂玲,张鹏,郑建利,杨俊,赵丰玲,田昌庚,史春余. 中国粮油学报. 2012(02)
[9]五大类传统植物激素对植物响应盐胁迫的调控[J]. 姚曼红,刘琳,曾幼玲. 生物技术通报. 2011(11)
[10]RNAi技术研究新进展[J]. 周红建,黄松,王雄伟. 生物技术通报. 2010(12)
硕士论文
[1]番茄SlMADS23-like基因的克隆及功能研究[D]. 封叶.重庆大学 2016
[2]外源ABA和ZT对小麦穗花发育调控效应的研究[D]. 戴晓琴.河北农业大学 2002
[3]中国甘薯（Ipomoea batatas）品种资源遗传多样性及分子鉴定研究[D]. 王士泉.山东师范大学 2002
本文编号：3374277
【文章来源】：江苏师范大学江苏省
【文章页数】：127 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
甘薯各组织总RNA电泳图
江苏师范大学硕士学位论文20表2-4各组织RNA的浓度测定Table2-4DeterminationoftheconcentrationofRNAsineachtissue材料名称（中文）英文缩写浓度（ng/μL）260/280叶L937.81.99茎S541.61.84纤维根FR640.31.88发育根1DR1322.11.89发育根2DR2307.41.86成熟根MR370.11.92从以上结果我们可以看出，所提取RNA的质量良好，28S和18S条带较亮，5s条带明显，且亮度较弱，并且浓度较高，可用于后续反转录实验。2.3.2MADS-box基因的扩增根据已有的转录组数据，结合公布的I.trifida全基因组数据库，应用引物设计软件PrimerPremier5，设计得到8对MADS-box引物，以之前反转录所得徐22各组织（叶、茎、纤维根、发育根初期、发育根后期和成熟块根）混合cDNA为模板，分别对8个MADS-box基因进行了克拢如图2-2、2-3和2-4所示，所扩增条带大小与理论片段长度一致（IbMBP1：450bp，IbMBP2：666bp，IbMBP4：1036bp，IbMBP5：774bp，IbMBP6：648bp，IbMBP7：696bp，IbMBP8：636bp，IbMBP10：597bp），可以用于后续实验。图2-2MADS-box基因PCR电泳图Figure2-2ThePCRelectrophoresisofMADS-boxgenesM:DL2000Marker，1：IbMBP1，2：IbMBP2，3：IbMBP6，4：IbMBP7，5：IbMBP8，6：IbMBP10M:DL2000Marker,1:IbMBP1,2:IbMBP2,3:IbMBP6,4:IbMBP7,5:IbMBP8,6:IbMBP10
第二章甘薯MADS-box基因的筛选及克隆21图2-3IbMBP4基因PCR电泳图Figure2-3ThePCRelectrophoresisofIbMBP4geneM:DL2000Marker，1~5：IbMBP4基因M:DL2000Marker,1~5:IbMBP4gene图2-4IbMBP5基因PCR电泳图Figure2-4ThePCRelectrophoresisofIbMBP5geneM:DL2000Marker，1：IbMBP5基因M:DL2000Marker,1:IbMBP5gene2.3.3阳性单克隆的筛选将PCR所得条带经过纯化加A尾后，与克隆载体pMD19-T连接，转入大肠杆菌感受态细胞后，利用菌落PCR对长出的单菌落进行阳性鉴定。如图2-5至2-11所示，筛选获得7个IbMBP1阳性克垄7个IbMBP2阳性克垄10个IbMBP4阳性克垄8个IbMBP5阳性克垄3个IbMBP6阳性克垄6个IbMBP7阳性克垄7个IbMBP8阳性克隆和8个IbMBP10阳性克拢图2-5IbMBP1基因菌落PCRFigure2-5ThebacteriaPCRofIbMBP1geneM:DL2000Marker，1~7：七个IbMBP1阳性克隆M:DL2000Marker,1~7:sevenIbMBP1positiveclones
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘薯种植对苏北沿海滩涂土壤环境的影响[J]. 刘冲,王茂文,邢锦城,丁海荣,朱小梅,赵宝泉,董静,温祝桂,洪立洲. 浙江农业学报. 2016(11)
[2]甘薯抗旱鉴定及生理响应研究[J]. 刘恩良,曹清河,唐君,金平. 新疆农业科学. 2016(06)
[3]我国薯类基础研究的动态与展望[J]. 张鹏. 生物技术通报. 2015(04)
[4]甘薯耐非生物胁迫的分子生物学研究进展[J]. 王福琴,侯夫云,秦桢,李爱贤,董顺旭,王庆美,张立明. 基因组学与应用生物学. 2015(01)
[5]甘薯块根生长及其淀粉体发育过程的解剖结构特征[J]. 荆彦平,李栋梁,刘大同,余徐润,胡慕兰,顾蕴洁,王忠. 西北植物学报. 2013(12)
[6]国内外甘薯产业发展概况[J]. 马剑凤,程金花,汪洁,戴红君,戴起伟. 江苏农业科学. 2012(12)
[7]中国甘薯产业及产业技术的发展与展望[J]. 马代夫,李强,曹清河,钮福祥,谢逸萍,唐君,李洪民. 江苏农业学报. 2012(05)
[8]不同类型甘薯品种主要经济性状和营养成分差异[J]. 刘桂玲,张鹏,郑建利,杨俊,赵丰玲,田昌庚,史春余. 中国粮油学报. 2012(02)
[9]五大类传统植物激素对植物响应盐胁迫的调控[J]. 姚曼红,刘琳,曾幼玲. 生物技术通报. 2011(11)
[10]RNAi技术研究新进展[J]. 周红建,黄松,王雄伟. 生物技术通报. 2010(12)
硕士论文
[1]番茄SlMADS23-like基因的克隆及功能研究[D]. 封叶.重庆大学 2016
[2]外源ABA和ZT对小麦穗花发育调控效应的研究[D]. 戴晓琴.河北农业大学 2002
[3]中国甘薯（Ipomoea batatas）品种资源遗传多样性及分子鉴定研究[D]. 王士泉.山东师范大学 2002
本文编号：3374277
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