水稻OsVDAC6的表达及亚细胞定位

发布时间：2021-09-24 04:21

　　VDAC （Voltage-dependent anion channel）是位于线粒体外膜上参与细胞质和线粒体膜间物质及能量交换的主要通道,在细胞程序性死亡、能量代谢、物质运输以及信号转导过程中起着重要的作用。前期实验室在水稻基因组中鉴定出8个OsVDAC基因。为研究OsVDAC6的功能,本研究根据水稻OsVDAC6的ORF序列设计引物,将相应编码区克隆至原核表达载体pET-32a （+）中,通过IPTG诱导Os VDAC6融合蛋白表达,利用Western Blot检测目的蛋白。构建了pM999-OsVDAC6-GFP瞬时表达载体,转化水稻原生质体后用激光共聚焦显微镜观察荧光信号。结果表明OsVDAC6被成功克隆到pET-32a（+）和pM999-GFP载体,0.5mmoL/L IPTG 16℃诱导8 h可大量表达49 kD可溶性目的蛋白,并且Os VDAC6定位于线粒体。本试验结果为进一步研究OsVDAC6的功能提供了科学依据。 

【文章来源】：分子植物育种. 2020,18(13)北大核心CSCD

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【部分图文】：

pET-32a-OsVDAC6重组质粒鉴定注:A:质粒PCR检测;B:Eco RⅠ酶切鉴定;M,M2:DL2000DNA Marker;M1:DL15000 DNA Marker;1～8:pET-32a-OsV-DAC6;9:pET-32a

图1 pET-32a-OsVDAC6重组质粒鉴定注:A:质粒PCR检测;B:Eco RⅠ酶切鉴定;M,M2:DL2000DNA Marker;M1:DL15000 DNA Marker;1～8:pET-32a-OsV-DAC6;9:pET-32a1.4 OsVDAC6的亚细胞定位分析

pM999-Os VDAC6-GFP转化水稻黄化幼苗原生质体，培养10 h后用线粒体染料染色30 min，制片后在激光共聚焦显微镜下观察荧光分布，结果显示，Os VDAC6定位于线粒体(图4)。2 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻OsVDAC2基因的克隆及亚细胞定位分析[J]. 钟英健,王春台,刘学群,徐鑫.  中国农学通报. 2015(24)



本文编号：3407086