小麦E3泛素连接酶TaSAP5的功能鉴定及调控途径解析

发布时间：2021-10-17 11:41

　　本论文在小麦TaSAP5分离克隆的基础上,完成了其在干旱胁迫下的功能鉴定及调控途径解析。我们发现TaSAP5超表达显著提高小麦和拟南芥的抗旱性,其编码蛋白具有泛素E3连接酶功能,并能介导DREB2A互作蛋白DRIP （DREB2A INTERACTING PROTEIN）的降解,进而增加DREB2A蛋白的积累。取得的主要研究结果如下:1.来自A、B、D染色体组的TaSAP5部分同源基因都受干旱胁迫的诱导表达,超表达TaSAP5转化拟南芥和小麦能够显著提高其抗旱性,且不影响正常生长条件下的生长。2.通过RNA-seq分析和RT-PCR分析发现,超表达TaSAP5小麦和拟南芥转基因株系在干旱胁迫后与WT相比,DREB2A下游基因显著上调表达,而DREB2A自身的转录表达并无显著差异。通过Western blot发现干旱胁迫后DREB2A蛋白在超表达TaSAP5转基因株系中显著高于对照,说明TaSAP5可能通过蛋白质水平促进DREB2A蛋白的表达;3.在小麦原生质体中进行亚细胞定位实验发现TaSAP5定位在细胞核与细胞质,通过体外泛素化实验验证了 TaSAP5具有E3泛素连接酶功能;4.通过... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－?２不同类型的Ｅ３泛素连接酶（引自Ｗｅｎｄｙ?Ｊ．?Ｌｙｚｅｎｇａ?ｅｔ?ａ?Ｉ．?，?２０１１?）??

图２－?１小麦超表达载体示意图??２．?１．３．?２拟南芥超表达载体构建：??１．目的基因Ｔａ＆４Ｐ５扩增所用引物：??ＴａＳＡＰ５－?ｐＥＧＡＤ?－Ｌ：?５５－?ＣＴＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＴＧＧＣＧＣＡＧＣＧＧＧＡＴＣＡＣＡ－３，??ＴａＳＡＰ５－?ｐＥＧＡＤ?－Ｒ：?５５－?ＴＡＴＣＴＡＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＴＣＡＧＡＡＣＣＴＧＡＣＧＡＧＣＴＴＧ－３？??２．?ＰＣＲ反应体系：??反应体系同２．１．４．１??３．?ＰＣＲ扩增程序：??９８°Ｃ，?５?ｍｉｎ；?９８°Ｃ?１０?ｓ，?５８°Ｃ?１５?ｓ，?７２°Ｃ?３５?ｓ，?３５?个循环；７２°Ｃ延伸?５?ｍｉｎ，?１２°Ｃ保ＰＣＲ产物通过重组克隆的方法连接到线性化的ｐＥＧＡＤ载体（图２－２），获得ｐＥＧＡＤ－ｒａ＾质粒。??

图２－?２拟南芥超表达载体示意图??


本文编号：3441703