苎麻木质素合成相关基因BnC3H-1的克
发布时间：2021-10-25 13:25
本研究通过对苎麻（Boehmeria nivea（L.）Gaud）高通量转录组测序数据的生物信息,获得了苎麻香豆酸-3-羟化酶（BnC3H-1）基因cDNA序列,针对该序列设计特异引物,结合RT-PCR和RACE技术成功克隆出一个BnC3H-1基因cDNA的全长序列,命名为BnC3H-1,并提交Gen Bank,基因登录号为KY078743。对BnC3H-1进行生物信息学分析表明,BnC3H-1基因cDNA序列全长为1940 bp,包含一个完整的开放读码框1536bp,5’UTR 96 bp,3’UTR 308 bp,其编码推导蛋白质含有511个氨基酸,相对分子量大小为57.8 kDa,理论等电点为8.61。利用BLAST在线分析,结果显示该基因编码蛋白具有Phe-x-x-Gly-x-Arg-x-Cys-x-Gly保守结构域,这与其他物种C3H基因编码蛋白的结构域相同,均为P450 98A亚家族成员。RT-qPCR（Quantitative Real-time PCR）分析表明,BnC3H-1在苎麻不同时期的木质部和韧皮部均有表达,在木质部中表达相对较高。BnC3H-1在同一时期,不同...
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
木质素单体的生物合成途径[15]
全处于沉默状态而不转录。质粒转入到含有染色体 T7 RNA 启动子的工程菌中，即可开始生产株是噬菌体 DE3 的溶源菌，噬菌体 DE3 是一种衍生的噬菌体，带区和 lacI 基因，lacUV5 启动子，以及 T7RNA 聚合酶基因（S1986;Novy and Morris,2001）。这一区段被插入 int 基因，因此，阻止噬菌体时整合到染色体上或从染色体切出。一旦形成 DE3 溶原状态 诱导的 lacUV5 启动子指导 T7RNA 聚合酶基因开始转录，在溶原培G 诱导 T7RNA 聚合酶生产，继而质粒上的目的 DNA 开始转录，产·Tag 是常用的纯化蛋白的融合标签，特别是那些以包涵体形式表达的在完全变性的条件下溶解，继而进行亲和纯化。pET-22b 载体含有 H核表达载体构建和重组蛋白纯化
图 2-2 SMARTer 5’RACE 原理图Fig 2-2 SMARTer 5’RACE illustrative diagram注：poly A+RNA：带有 poly（A）尾的信使 RNASMARTer first-strand synthesis：第一链合成5’RACE-Ready cDNA：可以用于 5’RACE PCR 扩增的 cDNA5’RACE PCR：5’端扩增的聚合酶链式反应First round of PCR：第一轮 PCR 扩增Incorporation of suppression PCR inverted repeat elements:－by Long Universal Primer：通过长的通用引物抑制 PCR 反向重复扩增Second round of PCR：第二轮 PCR 扩增Gene-specitic synthesis：基因的特异性合成Remaining rounds PCR Amplification of 5’fragment：通过两轮扩增 5’片段In-Fusion homology 15bp sequence－added to the 5’-end of GSP1 for In-Fusion cloning：在 GSP1 的 5’端加入 15bp 的同源序列进行融合克隆
【参考文献】：
期刊论文
[1]核盘菌液滴凝集素SSL-6基因过表达质粒构建与油菜转化[J]. 李浪,刘正立,刘询,刘春林. 分子植物育种. 2017(01)
[2]彩色马铃薯品种‘转心乌’类黄酮-3’5’-羟化酶（F3’5’H）基因的生物信息学和表达分析[J]. 肖继坪,杨晓娜,郭华春. 基因组学与应用生物学. 2015(07)
[3]苎麻肉桂酰辅酶A还原酶基因cDNA序列的克隆与分析[J]. 唐映红,陈建荣,刘芳,袁有美,郭清泉,昌洪涛. 作物学报. 2015(09)
[4]不同抗倒性甜荞茎秆木质素合成关键酶基因的表达分析[J]. 胡丹,刘星贝,汪灿,杨浩,李鹤鑫,阮仁武,袁晓辉,易泽林. 中国农业科学. 2015(09)
[5]丹参香豆酸-3-羟化酶基因（SmC3H）的生物信息学及其组织表达模式分析[J]. 王斌,韩立敏,化文平,陈尘. 基因组学与应用生物学. 2015(04)
[6]转录因子对木质素生物合成调控的研究进展[J]. 郭光艳,柏峰,刘伟,秘彩莉. 中国农业科学. 2015(07)
[7]几种新型植物基因表达载体的构建方法[J]. 张阳璞,杨淑慎. 生物工程学报. 2015(03)
[8]木质素的高值化利用研究进展[J]. 陈夫山,刘庆云. 湖南造纸. 2014(04)
[9]苎麻木质素合成酶CAD基因的cDNA克隆及表达分析[J]. 朱伟溢,陈建荣,彭彦,张学文,郭清泉,赵燕. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2014(05)
[10]紫花苜蓿DREB1基因的原核表达与蛋白纯化[J]. 闫艳,崔文艺,李大红,刘军和. 生态科学. 2014(04)
博士论文
[1]毛竹木质素单体生物合成相关基因的分离、表达与功能初步鉴定[D]. 杨学文.中国林业科学研究院 2009
[2]银杏黄酮相关基因的克隆及转化[D]. 刘学奋.复旦大学 2006
硕士论文
[1]苎麻木质素合成关键酶4CL和CCR基因cDNA序列的克隆与表达分析[D]. 唐映红.湖南农业大学 2015
[2]苎麻性别分化相关基因的克隆、表达及遗传转化研究[D]. 薛丽君.湖南农业大学 2015
[3]核盘菌分泌液蛋白质分析与罗勒烯诱导油菜菌核病抗性研究[D]. 刘正立.湖南农业大学 2015
本文编号：3457490
【文章来源】：湖南农业大学湖南省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
木质素单体的生物合成途径[15]
全处于沉默状态而不转录。质粒转入到含有染色体 T7 RNA 启动子的工程菌中，即可开始生产株是噬菌体 DE3 的溶源菌，噬菌体 DE3 是一种衍生的噬菌体，带区和 lacI 基因，lacUV5 启动子，以及 T7RNA 聚合酶基因（S1986;Novy and Morris,2001）。这一区段被插入 int 基因，因此，阻止噬菌体时整合到染色体上或从染色体切出。一旦形成 DE3 溶原状态 诱导的 lacUV5 启动子指导 T7RNA 聚合酶基因开始转录，在溶原培G 诱导 T7RNA 聚合酶生产，继而质粒上的目的 DNA 开始转录，产·Tag 是常用的纯化蛋白的融合标签，特别是那些以包涵体形式表达的在完全变性的条件下溶解，继而进行亲和纯化。pET-22b 载体含有 H核表达载体构建和重组蛋白纯化
图 2-2 SMARTer 5’RACE 原理图Fig 2-2 SMARTer 5’RACE illustrative diagram注：poly A+RNA：带有 poly（A）尾的信使 RNASMARTer first-strand synthesis：第一链合成5’RACE-Ready cDNA：可以用于 5’RACE PCR 扩增的 cDNA5’RACE PCR：5’端扩增的聚合酶链式反应First round of PCR：第一轮 PCR 扩增Incorporation of suppression PCR inverted repeat elements:－by Long Universal Primer：通过长的通用引物抑制 PCR 反向重复扩增Second round of PCR：第二轮 PCR 扩增Gene-specitic synthesis：基因的特异性合成Remaining rounds PCR Amplification of 5’fragment：通过两轮扩增 5’片段In-Fusion homology 15bp sequence－added to the 5’-end of GSP1 for In-Fusion cloning：在 GSP1 的 5’端加入 15bp 的同源序列进行融合克隆
【参考文献】：
期刊论文
[1]核盘菌液滴凝集素SSL-6基因过表达质粒构建与油菜转化[J]. 李浪,刘正立,刘询,刘春林. 分子植物育种. 2017(01)
[2]彩色马铃薯品种‘转心乌’类黄酮-3’5’-羟化酶（F3’5’H）基因的生物信息学和表达分析[J]. 肖继坪,杨晓娜,郭华春. 基因组学与应用生物学. 2015(07)
[3]苎麻肉桂酰辅酶A还原酶基因cDNA序列的克隆与分析[J]. 唐映红,陈建荣,刘芳,袁有美,郭清泉,昌洪涛. 作物学报. 2015(09)
[4]不同抗倒性甜荞茎秆木质素合成关键酶基因的表达分析[J]. 胡丹,刘星贝,汪灿,杨浩,李鹤鑫,阮仁武,袁晓辉,易泽林. 中国农业科学. 2015(09)
[5]丹参香豆酸-3-羟化酶基因（SmC3H）的生物信息学及其组织表达模式分析[J]. 王斌,韩立敏,化文平,陈尘. 基因组学与应用生物学. 2015(04)
[6]转录因子对木质素生物合成调控的研究进展[J]. 郭光艳,柏峰,刘伟,秘彩莉. 中国农业科学. 2015(07)
[7]几种新型植物基因表达载体的构建方法[J]. 张阳璞,杨淑慎. 生物工程学报. 2015(03)
[8]木质素的高值化利用研究进展[J]. 陈夫山,刘庆云. 湖南造纸. 2014(04)
[9]苎麻木质素合成酶CAD基因的cDNA克隆及表达分析[J]. 朱伟溢,陈建荣,彭彦,张学文,郭清泉,赵燕. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2014(05)
[10]紫花苜蓿DREB1基因的原核表达与蛋白纯化[J]. 闫艳,崔文艺,李大红,刘军和. 生态科学. 2014(04)
博士论文
[1]毛竹木质素单体生物合成相关基因的分离、表达与功能初步鉴定[D]. 杨学文.中国林业科学研究院 2009
[2]银杏黄酮相关基因的克隆及转化[D]. 刘学奋.复旦大学 2006
硕士论文
[1]苎麻木质素合成关键酶4CL和CCR基因cDNA序列的克隆与表达分析[D]. 唐映红.湖南农业大学 2015
[2]苎麻性别分化相关基因的克隆、表达及遗传转化研究[D]. 薛丽君.湖南农业大学 2015
[3]核盘菌分泌液蛋白质分析与罗勒烯诱导油菜菌核病抗性研究[D]. 刘正立.湖南农业大学 2015
本文编号：3457490
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