大麦组培体系的优化及miR528的遗传转化
发布时间：2021-11-01 11:23
大麦是世界上重要的禾谷类作物,因其用途广泛而被称为“三元作物”或“多元作物”。大麦为二倍体自花授粉作物,其染色体数少（2n=14）,基因组较小,在麦类作物中相对较易开展基因克隆和功能解析等分子生物学研究,目前已完成了全基因组测序和部分基因功能注释。成熟的遗传转化体系是基因克隆和功能解析的主要技术支撑之一。大麦功能基因的不断挖掘以及组培技术的持续完善,使大麦转基因技术有了较大进展,在基因功能研究方面取得了许多具有积极意义的成果,对MicroRNAs的功能解析就是其成果之一。诸多研究显示,在许多作物中,MicroRNAs参与其生长发育、抗病、抗逆等过程。miR528是近年发现的一种MicroRNA,在调控植物的生长发育和对盐渍和低氮的耐受性方面有重要作用。利用转基因技术对miR528进行有效利用及功能解析将为作物遗传改良提供重要信息,本研究以十个大麦品种的幼胚与成熟胚愈伤组织为材料,以潮霉素hptⅡ基因为筛选标记,利用农杆菌介导的遗传转化技术,将双35S启动子过表达osa-miR528基因载体导入大麦中,获得了含有目的基因osa-miR528的不同大麦品种的转基因阳性植株。主要结果如下:（...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GV3101单菌落osa-miR528部分序列PCR检测结果
30图 3 农杆菌介导的幼胚愈伤组织遗传转化流程Fig.3 Agrobacterium-mediated genetic transformation process of immature embryos callus注：A：幼胚 B：愈伤组织 C：共培养 D：恢复培养 E：分化筛选 F：生根培养 G：春化后炼苗 H-I：再生植株及移栽入土 J-K：T0 代转基因植株 L：种子的收获Note: A: Immature embryos B: Callus C: co-culture D: Recovery culture E: Differentiation screening F: Rooting cultureG: Training seedlings after vernalization H-I: Regenerated plants and transplanted into soil J-K: Transgenic plants of T0generation L: Harvested seeds
待再生苗在营养土中长势健壮时（见图3J），取其幼嫩叶片，提取DNA。然后用抗性筛选潮霉素基因hptⅡ引物对再生苗DNA进行PCR扩增检测，可以初步确定其中的转基因阳性植株。图4左图是再生苗中抗性筛选基因hptⅡ基因的PCR检测结果，目标条带大小为214 bp。由图4左图可以看出，再生植株中，有三株扩增出目标条带，且条带的大小与质粒相同。阴性对照没扩增出目标条带，因此，可以初步确定，获得了三株带有目标片段的转基因阳性植株，分别为华大麦5号两株，美里黄金一株。图4右图为遗传转化过程中，经PCR检测，初步鉴定得到的转基因植株，待其成熟后
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的旱稻遗传转化主要影响因素[J]. 李朝炜,冯丹,翟会青,刘梅,魏景芳. 湖北农业科学. 2014(15)
[2]一种适于营养胁迫研究的拟南芥水培方法[J]. 陈庆彬,雷凯健,赵航,郭莉,安国勇. 植物学报. 2014(04)
[3]优良大麦品种花30幼胚遗传转化体系的优化[J]. 高润红,杜志钊,郭桂梅,邹磊,何婷,陈志伟,李梁,陆瑞菊,黄剑华. 植物遗传资源学报. 2012(05)
[4]新一代测序技术应用于microRNA检测[J]. 汤海明,陈红,张静,任景怡,许宁. 遗传. 2012(06)
[5]大麦转基因技术研究进展及其应用[J]. 张仲博,张玉红,韩凝,边红武,朱睦元. 麦类作物学报. 2011(03)
[6]DNA测序技术发展及其展望[J]. 孙海汐,王秀杰. 科研信息化技术与应用. 2009(03)
[7]脱毒甘薯组培苗水培营养液配方筛选[J]. 罗林会,邱宁宏. 长江蔬菜. 2009(10)
[8]啤酒大麦幼胚愈伤组织诱导和植株高效再生[J]. 李静雯,张正英,李淑洁,赵丽娟. 安徽农业科学. 2009(10)
[9]生物信息学中的MicroRNA预测研究[J]. 赵东宇,王岩,罗迪,周春光,梁艳春. 吉林大学学报(信息科学版). 2008(03)
[10]绿萝水培扦插生根试验[J]. 李玲,赵兰枝,孙丽,崔广伟. 山东林业科技. 2006(01)
硕士论文
[1]农杆菌介导miR396基因对大麦愈伤组织的遗传转化[D]. 马春业.华中农业大学 2016
[2]黑粉菌菌丝形成相关基因的分离和遗传转化体系的建立[D]. 钱佳.浙江大学 2014
[3]含羞草水培技术试验研究[D]. 张仲新.河北农业大学 2007
[4]水培条件下广东万年青生理特性研究[D]. 黄小均.四川农业大学 2005
[5]水培生菜技术研究[D]. 潘杰.河南农业大学 2003
本文编号：3470025
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GV3101单菌落osa-miR528部分序列PCR检测结果
30图 3 农杆菌介导的幼胚愈伤组织遗传转化流程Fig.3 Agrobacterium-mediated genetic transformation process of immature embryos callus注：A：幼胚 B：愈伤组织 C：共培养 D：恢复培养 E：分化筛选 F：生根培养 G：春化后炼苗 H-I：再生植株及移栽入土 J-K：T0 代转基因植株 L：种子的收获Note: A: Immature embryos B: Callus C: co-culture D: Recovery culture E: Differentiation screening F: Rooting cultureG: Training seedlings after vernalization H-I: Regenerated plants and transplanted into soil J-K: Transgenic plants of T0generation L: Harvested seeds
待再生苗在营养土中长势健壮时（见图3J），取其幼嫩叶片，提取DNA。然后用抗性筛选潮霉素基因hptⅡ引物对再生苗DNA进行PCR扩增检测，可以初步确定其中的转基因阳性植株。图4左图是再生苗中抗性筛选基因hptⅡ基因的PCR检测结果，目标条带大小为214 bp。由图4左图可以看出，再生植株中，有三株扩增出目标条带，且条带的大小与质粒相同。阴性对照没扩增出目标条带，因此，可以初步确定，获得了三株带有目标片段的转基因阳性植株，分别为华大麦5号两株，美里黄金一株。图4右图为遗传转化过程中，经PCR检测，初步鉴定得到的转基因植株，待其成熟后
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的旱稻遗传转化主要影响因素[J]. 李朝炜,冯丹,翟会青,刘梅,魏景芳. 湖北农业科学. 2014(15)
[2]一种适于营养胁迫研究的拟南芥水培方法[J]. 陈庆彬,雷凯健,赵航,郭莉,安国勇. 植物学报. 2014(04)
[3]优良大麦品种花30幼胚遗传转化体系的优化[J]. 高润红,杜志钊,郭桂梅,邹磊,何婷,陈志伟,李梁,陆瑞菊,黄剑华. 植物遗传资源学报. 2012(05)
[4]新一代测序技术应用于microRNA检测[J]. 汤海明,陈红,张静,任景怡,许宁. 遗传. 2012(06)
[5]大麦转基因技术研究进展及其应用[J]. 张仲博,张玉红,韩凝,边红武,朱睦元. 麦类作物学报. 2011(03)
[6]DNA测序技术发展及其展望[J]. 孙海汐,王秀杰. 科研信息化技术与应用. 2009(03)
[7]脱毒甘薯组培苗水培营养液配方筛选[J]. 罗林会,邱宁宏. 长江蔬菜. 2009(10)
[8]啤酒大麦幼胚愈伤组织诱导和植株高效再生[J]. 李静雯,张正英,李淑洁,赵丽娟. 安徽农业科学. 2009(10)
[9]生物信息学中的MicroRNA预测研究[J]. 赵东宇,王岩,罗迪,周春光,梁艳春. 吉林大学学报(信息科学版). 2008(03)
[10]绿萝水培扦插生根试验[J]. 李玲,赵兰枝,孙丽,崔广伟. 山东林业科技. 2006(01)
硕士论文
[1]农杆菌介导miR396基因对大麦愈伤组织的遗传转化[D]. 马春业.华中农业大学 2016
[2]黑粉菌菌丝形成相关基因的分离和遗传转化体系的建立[D]. 钱佳.浙江大学 2014
[3]含羞草水培技术试验研究[D]. 张仲新.河北农业大学 2007
[4]水培条件下广东万年青生理特性研究[D]. 黄小均.四川农业大学 2005
[5]水培生菜技术研究[D]. 潘杰.河南农业大学 2003
本文编号：3470025
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3470025.html
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