简便烘干在水稻叶片DNA大量提取中的应用

发布时间：2021-12-09 22:06

　　为探索烘干法替代液氮冷冻法研磨水稻叶片提取DNA的可行性,首先比较50℃低温烘干法与液氮冷冻法研磨水稻叶片提取DNA的扩增效果,然后进一步分析不同温度（50、60、70、80、90℃）烘干水稻叶片研磨提取DNA的扩增效果,筛选最佳的烘干温度。结果表明,水稻叶片在50～70℃下烘干磨碎所提取的DNA均能进行有效扩增,以50℃效果最佳,其与液氮冷冻法研磨叶片提取DNA的扩增效果无明显差异。水稻叶片烘干法具有操作简单、费用低廉及实用性强等诸多优点,在DNA大量提取中可较好地替代液氮冷冻法对叶片进行制备,具有一定的推广应用价值。 

【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(02)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

烘干法磨样情况

利用以上2种方法研磨叶片组织提取DNA,为了更好地对比扩增效果,本研究使用了对DNA质量要求较高的四引物扩增受阻突变体系PCR技术,使用的水稻材料为纳雍五里香,PCR扩增产物的电泳检测图谱见图2。由图2可知, 50 ℃烘干磨碎与液氮冷冻研磨水稻叶片提取的DNA均能有效扩增出577、 257 bp 2条带,且扩增效果相当,表明50 ℃烘干磨碎与液氮冷冻研磨水稻叶片提取DNA的PCR扩增效果无明显差异,因此,50 ℃下烘干水稻叶片提取DNA方法切实可行。2.3 不同温度烘烤水稻叶片提取DNA的扩增效果分析

由图3可知,60 ℃烘干水稻叶片提取的DNA(毕粳43)和70 ℃烘干水稻叶片提取的DNA(纳雍五里香)均能进行有效扩增,两者扩增效果差异不明显,但条带亮度不及50 ℃烘干水稻叶片提取DNA的效果好,可能是由于温度高导致DNA降解的缘故,而80 ℃和90 ℃烘干水稻叶片提取的DNA未能进行有效扩增。试验结果表明,在温度不高于70 ℃的条件下对水稻叶片进行烘干磨碎提取DNA,可用于常规PCR扩增,以50 ℃最佳。3 结论与讨论

【参考文献】：
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本文编号：3531393