基因叠加和MIGS技术在水稻淀粉合成途径中的应用

发布时间：2022-01-14 01:13

　　水稻是世界三大粮食作物之一,全球超过半数的人以稻米为主粮。通过提高水稻单产、改善稻米品质,满足人类在生产生活等方面的多样化需求具有极大的应用价值,水稻种子内淀粉的贮存含量对于水稻的产量有重要作用。淀粉的合成通常是由多种酶参与反应完成,本研究通过应用miRNA诱导的基因沉默技术（miRNA-induced gene silencing, MIGS）和基因叠加技术（gene stacking, GS）两种不同的基因功能研究方法调控淀粉合成途径中关键基因表达,以期从淀粉组成、淀粉产量两方面来实现水稻产量和品质改良,主要研究内容及结果如下:1、基于前期建立的适用于单子叶植物的高效MIGS基因沉默体系,我们构建了定向沉默水稻颗粒结合淀粉合成酶基因（GBSSI）的MIGS-CsGBSSI单基因载体。通过半定量RT-PCR实验检测到OsGBSS1基因在转录水平被抑制表达;对胚乳进行碘染色实验观察发现,野生型呈蓝黑色,转基因胚乳呈红棕色,颜色与糯米染色结果较为接近;此外,在扫描电镜的观察下,转基因胚乳淀粉颗粒为圆形且排列致密,与野生型在形貌上存在一定的区别;利用双波长法测定直链淀粉含量得知,T代胚乳中... 

【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ｐＺＨＹ９３２骨架载体示意图??

第二章材料与方法单基因载体构建方法??ＯｓＧｌｕＡ２扩增产物、０以（＾１２扩增产物回收，％量混合，并以此ｓＧｌｕＡ２的上游５’端引物ＺＹ２８卜Ａ和ＣＭＧＰＺＪ的下游３’端引物ＺＹ２合ＰＣＲ，获得片段大小为３９７４ｂｐ的ｐＧｌｕＡ２ｍＧＴＡ２融合产物；对ｐＺ休和融合产物分别用．＾ｒ／、５〃／？／／／双酶切，Ｍ收人片段，浞合Ｍ收，构建单基因载体ＰＺＨＹ９７３。??处‘?／ｉ續／／／分别酶切载体ｐＺＨＹ９７３和扩增产物，回合回收产物进行迚接，构述单坫Ｗ跋体ｐＺＨＹ９７５。??连接产物均转化大肠杆菌，经Ｗ落ＰＣ’Ｒ验证，挑选阳性单克隆，取，测序验证。??ＡｓｃＩ?Ｘｂａｌ?ＢａｍＨＩ??

体和ａｙＧｆｉ＆Ｓ７片段，回收大片段产物后使川Ｇｉｂｓｏｉｉ连接方法，在ＭＣＳ位点处连??入该基因片段，构建了?ＭＩＧＳＯＧ５Ｗ／载体，并命名为ｐＺＬＬ０２５。??载体示意图如图３－２：??ｍｉＲ１７３?ｍｉＲ１７３ｔｓ??ＬＢ?｜￣?－Ｔ－Ｊ３３?＂?Ｊ?７?－?｛川??ＡｓｃＩ?Ｓｐｅｌ?Ｓｂｆｌ??图３－２ｐＺＬＬ０２５载体示意图??构建的载体用热激法转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，以引物ＺＬＬ００９－Ｆ、ＺＹＯＩＯ－Ｒａ进行??菌落ＰＣＲ验证；吸取鉴定为卩Ｈ性克隆的菌液，接种于ＬＢ液体培养基（５０ｍｇ／Ｌ?Ｋａｎ）??中扩大培养？，提取质粒ＤＮＡ，送至成都擎科梓熙生物技术有限公司测序；测序结??２８??

【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻产量相关数量性状基因研究进展[J]. 陈明亮,熊焕金,胡兰香,罗世友,刘志辉,肖叶青.  江西农业学报. 2014(12)
[2]基于2A肽策略构建多基因表达载体的研究进展[J]. 张欢,黄思超,蔡绍晖.  中国生物工程杂志. 2013(01)
[3]植物基因叠加技术的研究进展[J]. 谭茂玲,李晨,闫晓红,梁国鲁,魏文辉.  河南农业科学. 2011(04)

硕士论文
[1]基于MIGS的水稻高效基因沉默体系建立及应用[D]. 臧黎黎.电子科技大学 2015
[2]多基因聚合的高赖氨酸转基因水稻的选育及评价[D]. 陈锦珠.扬州大学 2014
[3]水稻胚乳特异性表达基因的鉴别及应用性探索[D]. 张海燕.浙江大学 2004



本文编号：3587507