水稻OsOFP22转录因子功能分析

发布时间：2022-10-21 09:33

　　卵型家族蛋白（OVATE FAMILY PROTEINS,OFPs）是一类植物特有的转录因子蛋白,在拟南芥、水稻、辣椒、番茄、香蕉等双子叶和单子叶植物中广泛存在。OFPs在胚珠和维管束的形成、果实形状形成、DNA的修复、次生细胞壁的形成、果实成熟等植物生长发育过程中发挥重要作用。同时,OFPs还参与赤霉素（GA,Gibberellin）、油菜素内酯（BR,Brassinolide）、乙烯（Ethylene）等激素的合成代谢和信号传递的过程。在拟南芥中过表达OFPs会导致叶片变短变圆、种荚变短变宽,拟南芥OFPs蛋白发挥转录抑制的作用。在单子叶模式植物水稻（Oryza Sativa）中,OsOFP2过表达引起叶片变短变窄,OsOFP2可能通过与KNEX和BELL家族中的蛋白互作来抑制GA的合成;OsOFP8过表达植株叶片倾角增大,反之减小,OsOFP8通过与Os GKS2互作被磷酸化后运输至细胞核外。本研究前期结果显示,OsOFP22过表达植株表现出节间短缩、叶片变短变宽、叶绿素含量高,种子变短变圆、晚花等表型;转基因幼苗对GA敏感性提高,对BR敏感性降低。为进一步研究OsOFP22调节... 

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词对照表
第1章 绪论
    1.1 植物转录因子简介
    1.2 OFPs转录因子的发现、结构及其功能
        1.2.1 OFPs转录因子的发现
        1.2.2 OFPs转录因子的结构
        1.2.3 OFPs转录因子的功能
    1.3 OFPs转录因子与植物激素的关系
        1.3.1 OFPs转录因子与赤霉素的关系
        1.3.2 OFPs转录因子与油菜素内酯的关系
        1.3.3 OFPs转录因子与乙烯的关系
    1.4 水稻OsOFP22转录因子的研究现状
    1.5 Crispr/Cas9系统的介绍
    1.6 研究目的与意义
第2章 构建Crispr/Cas9载体
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株材料
        2.1.2 植物材料
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验药品及试剂
        2.1.5 引物
        2.1.6 基因Locs号
        2.1.7 软件
    2.2 实验方法
        2.2.1 设计sgRNA
        2.2.2 提取植物基因组DNA
        2.2.3 琼脂糖凝胶制作及核酸电泳
        2.2.4 扩增目的片段
        2.2.5 纯化目的片段
        2.2.6 体外验证靶点效率
        2.2.7 载体构建转化大肠杆菌及测序
        2.2.8 制备电击法农杆菌感受态
        2.2.9 电击法转化农杆菌
        2.2.10 鉴定农杆菌阳性克隆
    2.3 结果与分析
        2.3.1 设计基因的靶点RNA
        2.3.2 Kitaake基因组DNA提取
        2.3.3 目的基因PCR产物
        2.3.4 体外检测靶点效率
        2.3.5 Crispr/Cas9载体构建
        2.3.6 鉴定大肠杆菌阳性克隆
        2.3.7 鉴定农杆菌阳性克隆
    2.4 结论与讨论
        2.4.1 结论
        2.4.2 讨论
第3章 遗传转化、阳性苗鉴定及表型初步分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 实验药品
        3.1.5 溶液的配制
        3.1.6 引物
    3.2 实验方法
        3.2.1 遗传转化水稻愈伤
        3.2.2 潮霉素筛选水稻转基因种子
        3.2.3 提取转基因和野生型水稻DNA
        3.2.4 提取水稻RNA及反转录
        3.2.5 实时定量荧光PCR
        3.2.6 扩增插入基因组的片段
        3.2.7 油菜素内酯类化合物处理BL6
    3.3 结果与分析
        3.3.1 遗传转化水稻愈伤过程
        3.3.2 水稻DNA提取结果
        3.3.3 PCR扩增插入水稻基因组的Crispr/Cas9载体片段
        3.3.4 BL5、BL6和野生型的总RNA提取
        3.3.5 BL5、BL6中OsOFPs转录水平的变化
        3.3.6 BL5、BL6 T1代植株生长
        3.3.7 BL处理引起BL6幼苗叶片倾角变大
    3.4 结论与讨论
        3.4.1 结论
        3.4.2 讨论
第4章 OsOFP22转录因子转录活性的确定
    4.1 实验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株与载体
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 实验药品及试剂
        4.1.5 溶液的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 扩繁DH5α阳性克隆及质粒提取
        4.2.2 制作琼脂糖凝胶及核酸电泳
        4.2.3 拟南芥点种和移苗
        4.2.4 游离拟南芥原生质体及转化
        4.2.5 测定LUC和GUS值
    4.3 结果与分析
        4.3.1 质粒电泳结果
        4.3.2 GUS相对活性
    4.4 结论与讨论
        4.4.1 结论
        4.4.2 讨论
第5章 OsOFP22转录因子调节的下游基因鉴定
    5.1 实验材料
        5.1.1 推断的下游基因的Qpcr引物
        5.1.2 推断的下游基因的Lcos号
        5.1.3 植物材料
        5.1.4 实验仪器
        5.1.5 实验药品
        5.1.6 溶液的配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 水稻催芽及提取总RNA
        5.2.2 实时荧光定量PCR及数据分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 OsOFP22过表达、BL6和野生型水稻总RNA结果
        5.3.2 推断的下游基因在OsOFP22过表达和BL6幼苗中的相对表达量
    5.4 结论与讨论
        5.4.1 结论
        5.4.2 讨论
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻理想株型的遗传基础研究[J]. 冷语佳,钱前,曾大力.  中国稻米. 2014(02)
[2]Brassinosteroid Signaling and Application in Rice[J]. Hongning Tong,Chengcai Chu State Key Laboratory of Plant Genomics and Center for Plant Gene Research(Beijing),Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences,Beijing 100101,China.  遗传学报. 2012(01)

博士论文
[1]水稻OsOFP转录因子家族基因克隆与功能分析[D]. 于慧.吉林大学 2015



本文编号：3695384