兰科几种珍稀药用植物的丛生芽诱导研究

发布时间：2022-12-09 03:25

　　本研究以兰科几种珍稀药用植物（杜鹃兰、金钗石斛、白及）为试验材料,研究其丛生芽发生的影响因素和诱导途径,在成功建立了这几种植物丛生芽化学诱导方法的基础上,也对其丛生芽的转基因诱导进行了探索。主要研究结果如下:1、以杜鹃兰种子无菌萌发的原球茎为试材,研究不同培养基、不同种类及浓度的植物生长调节物质、不同浓度活性炭及不同培养条件对杜鹃兰原球茎增殖的影响。结果表明:以1/2MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+IBA 1.0 mg·L^-1+活性炭0.5 g·L^-1为增殖培养基,温度15℃,光照强度2000 lx时有利于杜鹃兰原球茎的增殖,增殖的原球茎呈丛生型且长势较好,40 d内增殖率可达177.11%;以生长势好的增殖原球茎为试验材料,研究不同含量的大量元素、不同种类及浓度的植物生长调节物质、活性炭及正交优化试验（TDZ、IAA、蔗糖、大量元素）对杜鹃兰“芽丛”诱导增殖的影响。结果表明:1/4MS培养基附加TDZ 1.5 mg·L^-1+IAA 0.4 mg·L^-1+蔗糖30 g·L... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 兰科植物概述
    2 兰科植物的药理作用
    3 兰科植物的组织培养
        3.1 兰科植物组织培养的研究进展
        3.2 兰科植物丛生芽的化学诱导研究现状
    4 兰科植物遗传转化研究现状
    5 研究目的和意义
第二章 兰科几种珍稀药用植物丛生芽的化学诱导研究
    第一节 杜鹃兰“丛生芽”的化学诱导
        1 试验材料
        2 试验设计
            2.1 杜鹃兰原球茎的增殖条件
                2.1.1 培养基
                2.1.2 植物生长调节物质
                2.1.3 活性炭
                2.1.4 培养条件
            2.2 杜鹃兰“芽丛”的化学诱导
                2.2.1 大量元素
                2.2.2 植物生长调节物质
                2.2.3 活性炭
                2.2.4 正交优化试验
            2.3 数据统计及分析方法
        3 结果与分析
            3.1 培养条件对杜鹃兰原球茎增殖的影响
                3.1.1 培养基组分对杜鹃兰原球茎增殖的影响
                3.1.2 植物生长调节物质对杜鹃兰原球茎增殖的影响
                3.1.3 活性炭对杜鹃兰原球茎增殖的影响
                3.1.4 光照强度和温度对杜鹃兰原球茎增殖的影响
            3.2 培养条件对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
                3.2.1 大量元素对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
                3.2.2 细胞分裂素对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
                3.2.3 生长素对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
                3.2.4 活性炭对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
                3.2.5 植物生长调节物质、蔗糖及大量元素对杜鹃兰“芽丛”诱导的影响
        4 讨论
            4.1 原球茎增殖
            4.2 “芽丛”的化学诱导
    第二节 金钗石斛丛生芽的化学诱导
        1 试验材料
        2 试验设计
            2.1 金钗石斛种子消毒与萌发
            2.2 金钗石斛愈伤组织的诱导
            2.3 金钗石斛丛生芽的诱导
            2.4 数据统计及分析方法
        3 结果与分析
            3.1 消毒时间和植物生长调节物质对金钗石斛种子萌发的影响
            3.2 植物生长调节物质及活性炭对金钗石斛愈伤组织诱导的影响
            3.3 植物生长调节物质及活性炭对金钗石斛丛生芽诱导的影响
        4 讨论
    第三节 白及丛生芽的化学诱导
        1 试验材料
        2 试验设计
            2.1 白及种子的无菌萌发
            2.2 白及丛生芽的化学诱导
            2.3 数据统计及分析方法
        3 结果与分析
            3.1 NAA对白及种子萌发的影响
            3.2 6-BA对白及丛生芽诱导的影响
        4 讨论
第三章 兰科几种珍稀药用植物丛生芽的转基因诱导研究
    第一节 材料与设备
        1 试验材料
            1.1 植物材料
            1.2 农杆菌菌株与质粒
        2 试剂与仪器
            2.1 主要生化试剂
            2.2 主要仪器
        3 常用培养基
            3.1 农杆菌培养基
            3.2 植物培养基
    第二节 试验设计
        1 根癌农杆菌的培养
        2 卡那霉素敏感性试验
        3 遗传转化方法
        4 不同因素对遗传转化的影响
            4.1 材料的生理状态
            4.2 创伤方式
            4.3 菌液OD600值
            4.4 预培养时间
            4.5 共培养时间
            4.6 侵染时间
        5 GUS组织化学法检测
        6 转化植株的PCR检测
            6.1 合成引物
            6.2 杜鹃兰、金钗石斛和白及植株的DNA提取
            6.3 小量快速抽提法提取质粒DNA
            6.4 PCR扩增
        7 数据统计及分析方法
    第三节 结果与分析
        1 杜鹃兰、金钗石斛和白及对Kan的敏感性
        2 不同因素对遗传转化的影响
            2.1 材料的生理状态对杜鹃兰、金钗石斛和白及GUS表达率的影响
            2.2 创伤方式对杜鹃兰和金钗石斛GUS表达率的影响
            2.3 菌液OD600值对杜鹃兰、金钗石斛和白及GUS表达率的影响
            2.4 预培养时间对杜鹃兰、金钗石斛和白及GUS表达率的影响
            2.5 共培养时间对杜鹃兰、金钗石斛和白及GUS表达率的影响
            2.6 侵染时间对杜鹃兰、金钗石斛和白及GUS表达率的影响
        3 GUS组织化学检测
        4 转基因植株的PCR检测
        5 讨论
第四章 总结与展望
    1 总结
        1.1 杜鹃兰“芽丛”的化学诱导
        1.2 金钗石斛丛生芽的化学诱导
        1.3 白及丛生芽的化学诱导
        1.4 兰科几种珍稀药用植物丛生芽的转基因诱导研究
    2 本研究的创新之处
    3 后续工作与展望
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]海伦兜兰的无菌播种与快速繁殖[J]. 胡琦敏,李勇毅,黄云峰,胡仁传,吴坤林.  植物生理学报. 2016(09)
[2]霍山石斛快速繁殖技术研究[J]. 方香香,谢欢,伍奥林,张寿文.  中国现代中药. 2015(06)
[3]霍山石斛组培培养基筛选[J]. 刘建美.  现代园艺. 2015(09)
[4]农杆菌介导的墨兰遗传转化[J]. 谢利,王芬,曾瑞珍,郭和蓉,周玉亮,张志胜.  生物工程学报. 2015(04)
[5]金钗石斛种子萌发率提高及可诱导愈伤组织培养基的研究[J]. 徐德林,蔡振锋,张林,储士润,祝飞,钱刚.  遵义医学院学报. 2014(05)
[6]白芨种子的高效萌发及其无性繁殖体系的构建[J]. 王楷,李玥,张云峰,田宝强,杨秀梅,普家宁,严胜柒.  云南师范大学学报(自然科学版). 2014(04)
[7]不同氮源对铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的影响[J]. 练华山,杨贵先,李焕秀.  北方园艺. 2014(07)
[8]莲瓣兰“滇梅”根状茎的增殖与分化技术研究[J]. 刘昳雯,许春梅,王丹,李枝林.  安徽农业科学. 2014(10)
[9]杂交兰类原球茎增殖中芽分化的控制和快速繁殖[J]. 谢利,马晓娟,郭和蓉,曾瑞珍,张志胜.  植物生理学报. 2014(02)
[10]农杆菌介导的DnMADS2基因转化金钗石斛初步研究[J]. 闻真珍,何春梅,刘运权,刘伟.  热带作物学报. 2013(11)

硕士论文
[1]稀土元素镧、铈对金线兰离体培养的影响及机理初探[D]. 徐迎亚.广州中医药大学 2016
[2]山慈菇（杜鹃兰）快速繁殖技术优化及铁皮石斛叶cDNA PCR文库的构建[D]. 冯沛春.西南交通大学 2014
[3]铁皮石斛NAC基因的遗传转化[D]. 石彩娟.西南交通大学 2013
[4]山慈菇（杜鹃兰）快速繁殖技术体系的建立[D]. 廖婷婷.西南交通大学 2012
[5]农杆菌介导法转ipt基因创造半夏新种质[D]. 王新颖.贵州大学 2009
[6]杜鹃兰重要生理特性和生态适应性研究[D]. 张丽霞.贵州大学 2008
[7]金钗石斛快速繁殖及其生物碱累积的研究[D]. 唐金刚.贵州师范大学 2005



本文编号：3714722