冬虫夏草内生真菌及其活性成分的研究
发布时间：2023-02-09 14:46
冬虫夏草(Chinese Cordyceps)是我国一味名贵中草药,是多种真菌共存共生、与蝙蝠蛾幼虫尸体组成的菌虫复合体。冬虫夏草内生真菌的分离、无性型的确定和人工发酵培养是冬虫夏草的研究热点之一。本文在分离和鉴定冬虫夏草内生真菌的基础上,对内生真菌生产和冬虫夏草具有相似活性成分进行了分析,同时优化了内生真菌的培养基组成,该研究对于发掘新型药用微生物资源、寻找冬虫夏草替代品和保护冬虫夏草种质资源具有重要的意义。首先,利用常规的内生真菌的分离方法,从冬虫夏草中分离内生真菌30多株,选取其中6株内生真菌,根据其克隆的形态特征、产孢特性以及分子特征确定其分类地位。结果表明:分离的6株真菌分别属于镰刀菌属(Fusarium spp.),毛霉属(Mucor spp.),被孢霉属(Mortierella spp.)三个属。其次,在摇瓶内对6个菌株进行液体培养,用高效液相色谱法对其发酵菌液中与冬虫夏草相关活性成分(包括尿苷、鸟苷、腺苷和虫草素)进行分析。结果表明该6株真菌的发酵液中均能检测到尿苷、鸟苷、腺苷和虫草素等活性成分。通过对不同菌株产生活性成分的含量进行比较,发现镰刀菌属真菌NS2-B1产生...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 冬虫夏草内生真菌的研究概况
1.1.1 基于可培养的方法分离内生真菌的研究
1.1.2 基于非培养的方法内生真菌种群结构的分析
1.2 冬虫夏草分子生物学的其它研究
1.2.1 分子标记技术在冬虫夏草研究中的应用
1.2.2 DNA指纹图谱技术在冬虫夏草研究中的应用
1.3 论文的目的与意义
第二章 冬虫夏草内生真菌的分离鉴定及活性成分的测定
2.1 材料
2.2 试剂与培养基
2.3 主要仪器和设备
2.4 实验方法
2.4.1 冬虫夏草内生真菌菌株的分离和纯化
2.4.2 冬虫夏草内生真菌的生长特性
2.4.3 冬虫夏草内生真菌的形态学鉴定
2.4.4 冬虫夏草内生真菌分子生物学鉴定
2.5 实验结果
2.5.1 冬虫夏草内生真菌的形态学鉴定结果
2.5.2 冬虫夏草内生真菌的生长速度
2.5.3 冬虫夏草内生真菌的分子生物学鉴定结果
2.6 讨论
第三章 冬虫夏草内生真菌核苷成分的分析
3.1 材料
3.2 试剂与培养基
3.3 主要仪器和设备
3.4 实验方法
3.4.1 冬虫夏草内生菌样品的制备
3.4.2 冬虫夏草与北虫草样品的制备
3.4.3 冬虫夏草内生菌核苷成分高效液相测定方法的建立
3.5 实验结果
3.5.1 菌种发酵培养
3.5.2 高效液相色谱测定方法的建立
3.5.3 冬虫夏草、北虫草及冬虫夏草内生菌中核苷含量
3.6 讨论
第四章 冬虫夏草内生真菌(镰刀菌属真菌NS2-B1和毛霉属真菌NS2-Z)液体发酵培养基的筛选
4.1 材料
4.2 试剂与培养基
4.3 主要仪器和设备
4.4 实验方法
4.4.1 菌丝的培养
4.4.2 菌丝的收集
4.4.3 培养基碳源与氮源的筛选
4.4.4 正交试验优化复合碳氮源组合
4.4.5 数据处理
4.5 实验结果
4.5.1 冬虫夏草内生真菌培养基碳源与氮源的筛选结果
4.5.2 冬虫夏草内生真菌中菌丝量筛选碳源、氮源结果
4.5.3 冬虫夏草内生真菌中活性成分筛选碳、氮源结果
4.6 讨论
第五章 西藏冬虫夏草宏转录组分析
5.1 材料
5.2 试剂与培养基
5.3 主要仪器和设备
5.4 实验方法
5.4.1 冬虫夏草RNA抽提(组织)
5.4.2 RNA琼脂糖凝胶电泳的质量检测
5.4.3 RNA文库构建
5.4.4 数据处理
5.5 实验结果
5.5.1 RNA质量检测
5.5.2 转录本拼接及差异表达分析
5.5.3 GOfact功能分析注释
5.5.4 KEGG Pathway分析
5.6 讨论
第六章 总结与展望
6.1 全文总结
6.1.1 冬虫夏草内生真菌的分离鉴定及核苷成分的分析
6.1.2 冬虫夏草镰刀菌属真菌NS2-B1和毛霉属真菌NS2-Z液体发酵培养基的筛选
6.1.3 不同地理环境生长区域下冬虫夏草宏转录组分析
6.2 创新点
6.3 研究展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文
本文编号：3738911
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 冬虫夏草内生真菌的研究概况
1.1.1 基于可培养的方法分离内生真菌的研究
1.1.2 基于非培养的方法内生真菌种群结构的分析
1.2 冬虫夏草分子生物学的其它研究
1.2.1 分子标记技术在冬虫夏草研究中的应用
1.2.2 DNA指纹图谱技术在冬虫夏草研究中的应用
1.3 论文的目的与意义
第二章 冬虫夏草内生真菌的分离鉴定及活性成分的测定
2.1 材料
2.2 试剂与培养基
2.3 主要仪器和设备
2.4 实验方法
2.4.1 冬虫夏草内生真菌菌株的分离和纯化
2.4.2 冬虫夏草内生真菌的生长特性
2.4.3 冬虫夏草内生真菌的形态学鉴定
2.4.4 冬虫夏草内生真菌分子生物学鉴定
2.5 实验结果
2.5.1 冬虫夏草内生真菌的形态学鉴定结果
2.5.2 冬虫夏草内生真菌的生长速度
2.5.3 冬虫夏草内生真菌的分子生物学鉴定结果
2.6 讨论
第三章 冬虫夏草内生真菌核苷成分的分析
3.1 材料
3.2 试剂与培养基
3.3 主要仪器和设备
3.4 实验方法
3.4.1 冬虫夏草内生菌样品的制备
3.4.2 冬虫夏草与北虫草样品的制备
3.4.3 冬虫夏草内生菌核苷成分高效液相测定方法的建立
3.5 实验结果
3.5.1 菌种发酵培养
3.5.2 高效液相色谱测定方法的建立
3.5.3 冬虫夏草、北虫草及冬虫夏草内生菌中核苷含量
3.6 讨论
第四章 冬虫夏草内生真菌(镰刀菌属真菌NS2-B1和毛霉属真菌NS2-Z)液体发酵培养基的筛选
4.1 材料
4.2 试剂与培养基
4.3 主要仪器和设备
4.4 实验方法
4.4.1 菌丝的培养
4.4.2 菌丝的收集
4.4.3 培养基碳源与氮源的筛选
4.4.4 正交试验优化复合碳氮源组合
4.4.5 数据处理
4.5 实验结果
4.5.1 冬虫夏草内生真菌培养基碳源与氮源的筛选结果
4.5.2 冬虫夏草内生真菌中菌丝量筛选碳源、氮源结果
4.5.3 冬虫夏草内生真菌中活性成分筛选碳、氮源结果
4.6 讨论
第五章 西藏冬虫夏草宏转录组分析
5.1 材料
5.2 试剂与培养基
5.3 主要仪器和设备
5.4 实验方法
5.4.1 冬虫夏草RNA抽提(组织)
5.4.2 RNA琼脂糖凝胶电泳的质量检测
5.4.3 RNA文库构建
5.4.4 数据处理
5.5 实验结果
5.5.1 RNA质量检测
5.5.2 转录本拼接及差异表达分析
5.5.3 GOfact功能分析注释
5.5.4 KEGG Pathway分析
5.6 讨论
第六章 总结与展望
6.1 全文总结
6.1.1 冬虫夏草内生真菌的分离鉴定及核苷成分的分析
6.1.2 冬虫夏草镰刀菌属真菌NS2-B1和毛霉属真菌NS2-Z液体发酵培养基的筛选
6.1.3 不同地理环境生长区域下冬虫夏草宏转录组分析
6.2 创新点
6.3 研究展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文
本文编号：3738911
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