三叶木通MADS-box家族AktFL1及AktAG1的功能研究

发布时间：2023-02-13 19:38

　　三叶木通(Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.)为木通科(Lardizabalaceae)木通属(Akebia Decne.)药用藤本植物,属基部真双子叶植物类群,在被子植物演化史上具有承上启下的重要地位。三叶木通花的形态学研究发现:发育初期是两性花,后期雌花中的雄蕊及雄花中的心皮分别退化,从而形成功能上的单性花,可知三叶木通花的发育模式为Ⅰ型单性花发育途径。但其两性花发育为单性花的分子调控机制尚不清楚。研究表明,性别决定基因、表观遗传修饰和植物激素等是单性花性别分化的影响因素。MADS-box基因家族在调控单性花性别分化过程中占有重要地位。依据花发育“ABCDE”模型,其中的C类基因不仅为决定雄蕊和心皮发育的器官特征基因,而且很可能是调控植物性别分化的关键因素。A类基因不仅是决定萼片和花瓣发育的器官特征基因,并且对于模式生物拟南芥的研究发现,A类基因与C类基因在功能上具有相互拮抗的关系。因此为了研究三叶木通两性花发育为单性花的分子调控机制,探究三叶木通花发育A类和C类基因的关系,有必要对三叶木通A类及C类基因的功能进行研究。本研究为了了解三叶木通中A类和C类...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词表
第1章 文献综述
    1.1 被子植物花的性别发育
    1.2 被子植物花发育的分子机制研究概述
        1.2.1 花发育调控网络概述
        1.2.2 花发育模型
    1.3 A类及C类基因的研究进展概述
        1.3.1 A类及C类基因的结构进化
        1.3.2 A类及C类基因的功能进化
        1.3.3 蛋白互作研究技术及其发展
    1.4 三叶木通花发育的研究进展
        1.4.1 三叶木通花的形态学特征
        1.4.2 三叶木通花发育的分子机制研究
        1.4.3 实验室前期工作
        1.4.4 研究意义
第2章 三叶木通AktFL1、AktAG1基因的半定量表达研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要实验仪器
        2.1.4 实验准备
    2.2 实验方法
        2.2.1 三叶木通雌雄花不同时期总RNA的提取
        2.2.2 半定量RT-PCR
    2.3 结果与分析
        2.3.1 总RNA提取质量检测
        2.3.2 AktFL1、AktAG1基因的半定量表达结果分析
    2.4 讨论
        2.4.1 AktFL1基因的表达分析
        2.4.2 AktAG1基因的表达分析
第3章 三叶木通AktFL1、AktAG1基因转拟南芥过表达研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株与载体
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要实验仪器
        3.1.5 引物测序
    3.2 实验方法
        3.2.1 三叶木通总RNA的提取
        3.2.2 AktFL1、AktAG1基因ORF的克隆
        3.2.3 AktFL1、AktAG1基因过表达载体的构建
        3.2.4 重组表达载体质粒转化农杆菌感受态细胞
        3.2.5 农杆菌介导转化拟南芥植株
        3.2.6 转基因拟南芥植株的鉴定与表型观察
    3.3 结果与分析
        3.3.1 35S:AktFL1和35S::AktAG1过表达载体的构建
        3.3.2 35S::AktFL1转基因植株的分子鉴定
        3.3.3 35S::AktAG1转基因植株的分子鉴定
        3.3.4 转基因拟南芥植株的表型分析
    3.4 讨论
        3.4.1 AktFL1基因对花发育的调控功能
        3.4.2 AktAG1基因对花发育的调控功能
第4章 三叶木通AktFL1、AktAG1蛋白的亚细胞定位研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株与载体
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 AktFL1和AktAG1的基因ORF的克隆
        4.2.2 瞬时转化烟草细胞
        4.2.3 瞬时转化洋葱内表皮细胞
    4.3 结果与分析
        4.3.1 GFP融合蛋白表达载体的构建
        4.3.2 AktFL1、AktAG1蛋白在烟草细胞中的转化分析
        4.3.3 AktFL1、AktAG1蛋白在洋葱细胞的转化分析
    4.4 讨论
第5章 三叶木通AktFL1、AktAG1蛋白的相互作用研究
    5.1 实验材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 菌株与载体
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 双分子荧光互补(BiFC)表达载体的构建
        5.2.2 压力注射法瞬时转化烟草细胞
    5.3 结果与分析
        5.3.1 BiFC表达载体的构建
        5.3.2 AktFL1、AktAG1蛋白之间的相互作用
    5.4 讨论
第6章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果



本文编号：3742184