基于RNAi技术的转基因玉米逆转录数字PCR检测方法

发布时间：2023-02-21 19:12

　　针对基于RNAi技术的转基因玉米品系,研究并建立了一套逆转录芯片式数字PCR(dPCR)定量检测该品系玉米双链RNA的方法。研究内容主要包括RNA提取方法、引物探针设计、逆转录方法、dPCR反应条件及体系等方面的探索和优化。该方法的绝对定量限为2.5 copies/μL,RSD为12.4%;检测低浓度实际样品达21.7 copies/μL时,相对偏差为2.7%,RSD为14.6%,满足国际上转基因定量结果RSD≤25%的要求。将该方法用于基于RNAi技术转基因作物的定量检测,将为我国相关转基因作物的安全评价提供了精确可靠的技术手段。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 引物探针的设计
        1.2.2 转基因玉米总RNA的抽提方法优化
        1.2.3 RNA反转录为cDNA的方法优化
        1.2.4 数字PCR反应条件的优化
        1.2.5 数字PCR反应体系的优化
        1.2.6 实验方法的定量检测低限的测定
2 结果
    2.1 引物探针的设计
    2.2 转基因植物总RNA的提取方法优化
    2.3 转基因植物RNA的反转录方法优化
    2.4 数字PCR反应条件及体系优化
        2.4.1 数字PCR反应条件的优化
        2.4.2 数字PCR反应体系的优化
            2.4.2.1 探针浓度的优化
            2.4.2.2 引物浓度的优化
    2.5 实验方法的定量检测低限
3 讨论
4 结论



本文编号：3747856