昭通野生蜜环菌多样性及生物学特性研究

发布时间：2023-03-19 04:44

　　蜜环菌是一类具有药用和食用价值的高等真菌,是种植天麻的必备菌。近年来,云南天麻主产区昭通地区引入外来的蜜环菌种用于天麻种植过程中,出现了严重的菌种退化问题,导致天麻大量减产,造成了巨大的经济损失。经多方调查,了解到部分天麻种植户利用从当地森林里获取的野生蜜环菌种植天麻,不仅产量高而且品质好,表明该地区林地中具有可用于天麻生产的优质蜜环菌种资源。本实验在对昭通地区部分林地中野生蜜环菌进行调查采样,形态特征观察分类基础上,利用传统培养分离技术及DNA测序技术,对昭通5个地方的原始森林中采集的野生蜜环菌的子实体、菌索、孢子进行了研究,菌株子实体通过生物学形态特征观察分为16类,培养法共分离到野生蜜环菌40株。首先,测量了各菌株的菌落直径、菌索长度、菌索分支、菌索颜色、菌株生长速率等生物学特性。其次,对40株野生蜜环菌的IGS(intergenic spacer)片段进行了测序,将IGS序列相似度为97%的菌株定义为一个OTU,总计获得13个OTUs;通过系统发育分析所有OTUs均为Armillaria属,其中一个OTU为Armillaria sinapina种,其余菌株不能定种。最后,为探明...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 天麻研究概述
        1.1 天麻的药用价值和地理分布
        1.2 天麻形态学特征和生活史
        1.3 天麻栽培与共生蜜环菌
    2 蜜环菌研究概况
        2.1 蜜环菌生活习性及分布状况
        2.2 蜜环菌形态特征
        2.3 蜜环菌的生长条件
        2.4 蜜环菌生物多样性
        2.5 蜜环菌漆酶酶活性研究进展
    3 研究目的和意义
第二章 昭通野生蜜环菌形态、生理特征及遗传多样性研究
    1 材料和方法
        1.1 实验仪器及试剂
            1.1.1 实验仪器
            1.1.2 实验试剂
        1.2 培养基
        1.3 方法
            1.3.1 野生蜜环菌采样及保存方法
            1.3.2 野生蜜环菌子实体形态特征描述
        1.4 野生蜜环菌的分离和纯化
            1.4.1 菌索分离
            1.4.2 子实体分离
            1.4.3 孢子分离
        1.5 野生蜜环菌菌株DNA的提取
        1.6 真菌IGS基因的扩增
            1.6.1 PCR扩增体系和条件
            1.6.2 反应体系及扩增条件
            1.6.3 PCR产物琼脂糖凝胶纯化电泳检测：
        1.7 序列测序
        1.8 不同培养基上的生物学特征描述及生理指标测定
        1.9 数据分析
            1.9.1 序列OTU划分
            1.9.2 系统发育树构建
            1.9.3 菌株各项指标分析
    2 结果
        2.1 菌株采样情况
        2.2 菌株子实体形态特征
        2.3 野生蜜环菌株种属分子鉴定和系统发育
            2.3.1 野生蜜环菌株OTUs划分
            2.3.2 野生蜜环菌株种属鉴定
        2.4 野生蜜环菌株在不同培养基上的生长形态特征
            2.4.1 在玉米粉培养基上的生长特性
            2.4.2 在木屑培养基上的生长特性
            2.4.3 在木质素培养基上的生长特性
        2.5 菌株菌落直径
            2.5.1 菌索、子实体、孢子三种不同分离来源的菌株菌落直径
            2.5.2 不同采样地的菌株菌落直径
            2.5.3 不同OTU的菌落直径
        2.6 菌株菌索长度
            2.6.1 菌索、子实体、孢子三种不同分离来源菌索长度
            2.6.2 不同采样地菌株菌索长度
            2.6.3 不同OTU菌株菌索长度
        2.7 菌株生长速率
            2.7.1 菌索、子实体、孢子三种不同分离来源的菌株生长速率
            2.7.2 不同采样地菌株生长速率
            2.7.3 不同OTU菌株菌生长速率
第三章 野生蜜环菌株产酶特性初步研究
    1 材料仪器
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 培养基
        1.4 实验菌株
    2 方法
        2.1 昭通野生蜜环菌株分解木质素的鉴定
        2.2 昭通野生蜜环菌株分解纤维素的鉴定
        2.3 昭通野生蜜环菌株的漆酶酶活测定
            2.3.1 酶活测定方法及原理
            2.3.2 菌株漆酶酶活测定
        2.4 均匀设计优化产漆酶培养基
    3 结果和分析
        3.1 野生蜜环菌菌株分解木质素鉴定结果
        3.2 野生蜜环菌菌株分解纤维素鉴定结果
        3.3 漆酶酶活测定
            3.3.1 不同分离来源的菌株漆酶活性
            3.3.2 不同采样地菌株漆酶酶活性
            3.3.3 不同OUT的菌株漆酶活性
        3.4 高产漆酶菌株优化培养基均匀设计
第四章 结论与讨论
    1 昭通具有丰富的野生蜜环菌物种资源
    2 玉米培粉培养基适用于保存和研究野生蜜环菌株
    3 昭通野生蜜环菌能分解木质素而不分解羧甲基纤维素
展望
附录
参考文献
致谢



本文编号：3764582