小麦TaTCTP蛋白的原核表达及抗体制备

发布时间：2023-03-29 04:58

　　为了阐明翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein, TCTP)在小麦-叶锈菌互作中的作用及其机制,本研究克隆了TaTCTP的开放阅读框(ORF)全长,并经过原核表达、亲和纯化、动物免疫,制备了TaTCTP兔多克隆抗体。结果表明,该基因CDS区全长为507 bp,编码168个氨基酸,预期分子量为18.8 kD,并具有较高的可溶性。以纯化后的TaTCTP重组蛋白制备的抗体可以特异性识别TaTCTP,效价为1∶6 400。Western blotting检测发现TaTCTP在叶锈菌侵染后受诱导上调。本研究为进一步研究TaTCTP在小麦与叶锈菌互作过程中的功能及其作用机制奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1植物材料及供试菌株
        1.1.2试剂与药品
    1.2 试验方法
        1.2.1植物培养
        1.2.2基因克隆及载体构建
        1.2.3蛋白质可溶性分析
        1.2.4TaTCTP蛋白的诱导表达
        1.2.5TaTCTP蛋白的纯化
        1.2.6TaTCTP蛋白多克隆抗体的制备及特异性检测
        1.2.7Westernblotting免疫印迹法检测抗体特异性
2 结果与分析
    2.1 TaTCTP的克隆、分析与表达载体的构建
    2.2 TaTCTP的诱导表达及纯化
    2.3 TaTCTP抗体的制备及效价检测
    2.4 TaTCTP抗体的特异性检测
    2.5 小麦-叶锈菌互作中TaTCTP的表达
3 结论与讨论



本文编号：3774050