转基因玉米T25数字PCR方法的建立与验证

发布时间：2024-02-15 01:12

　　转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证。转基因玉米T25为我国批准进口用作加工原料的转基因植物。为加强对T25的监管,以T25基体标准物质为研究对象,建立数字PCR方法,并选择8家实验室,采用数字PCR联合定值测定。结果表明,T25/Adh1二重数字PCR系统具有良好的扩增特异性。初始模板量在100～10 000拷贝·μL^-1之间可获得稳定、可靠的检测结果。通过多实验室协同定值说明T25/Adh1二重数字PCR方法准确、可靠。T25基体标准物质的量值为1.001 2,相对不确定度为0.001 6。研究表明建立的T25/Adh1二重数字PCR方法可以用于转基因玉米T25的定量检测,为转基因成分定量检测提供了物质基础和技术保证。

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【部分图文】：

图1T25的PCR扩增图谱

参照农业部869号公告-14-2007《转基因植物及其产品成分检测耐除草剂玉米T25及其衍生品种定性PCR方法》[13]进行PCR检测。PCR结果(图1)显示,阴性对照和空白对照的T25基因检测结果均为阴性;5～10号样品的T25基因检测结果为阳性,含有T25转化体,但是无法满....

图2T25和Adh1二重数字PCR特异

不同玉米品种的T25/Adh1二重数字PCR检测结果(图2)显示,Adh1基因在空白对照中无阳性微滴,但在转基因玉米MON863、MON810、NK603、MIR604、TC1507和非转基因玉米NTC中均扩增正常。在Adh1基因扩增正常的情况下,T25基因只有在转基因玉米T25....

图3数字PCR的动力学范围测试

微滴式数字PCR的理论有效线性范围是1～120000个拷贝,但20μL反应液在微滴生成器中只能产生12000～16000个有效微滴,微滴数大于10000为有效反应。结果发现,当DNA模板量为1.8×105拷贝时,所有微滴均呈阳性,超出数字PCR的动力学范围。其他浓度微滴....

本文编号：3898933