水稻茉莉酸信号途径的关键基因OsLOX4,OsAOS2和OsLOX3的功能分析

发布时间：2024-03-05 05:34

　　水稻(Oryza sativa L.)是世界上最主要的粮食作物之一,水稻的产量受到全世界的关注。但是由于病虫害,病原微生物,洪涝灾害,土壤污染等原因导致水稻减产。提高水稻自身抗性是最好的解决办法,而植物的抗性是由一系列基因调控的,所以有必要对植物的抗性基因进行探索研究。植物激素在植物的生长发育过程中起着不可代替的作用。茉莉酸信号途径在植物防御/胁迫应答起着关键性的作用,脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)是茉莉酸合成途径中的第一个关键酶,以前的研究表明丙二烯氧化物合酶(Allene oxide synthase,AOS)与防御胁迫应答相关。在本研究中,我们以茉莉酸途径相关基因(OsLOX4,OsLOX3和OsAOS2)为研究对象。对OsLOX4和OsAOS2上游启动子序列进行分析,OsAOS2基因的启动子区含有TC-rich repeats,预测OsAOS2参与防御胁迫应答,与以前研究结果相一致,OsLOX4基因启动子含有创伤响应元件,参与水杨酸,茉莉酸甲酯激素响应,在此基础上构建了过表达载体OsAOs2-OE和OsLOX-4OE,农杆菌侵染转化,组织培养后,筛选验证,最后得到...

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 稻瘟病
    1.2 植物的免疫系统
    1.3 茉莉酸信号分子途径
    1.4 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物与供试菌株
        2.1.2 培养基及溶液
        2.1.3 生化试剂
        2.1.4 抗生素
    2.2 试验方法
        2.2.1 目的基因序列的获得
        2.2.2 目的基因的启动子分析
        2.2.3 CTAB法提取水稻基因组DNA
        2.2.4 引物设计
        2.2.5 目的基因片段的扩增
        2.2.6 E.coli DH5α感受态细胞的制备
        2.2.7 DNA的回收纯化
        2.2.8 质粒的提取
        2.2.9 酶切与连接
        2.2.10 连接产物转化DH5α感受态细胞
        2.2.11 菌液PCR验证
        2.2.12 农杆菌EHA105感受态的制备
        2.2.13 重组质粒转化农杆菌EHA105感受态细胞
        2.2.14 农杆菌介导的烟草瞬时转化
        2.2.15 转化农杆菌EHA105浸染水稻
        2.2.16 转基因植株的初筛
        2.2.17 水稻RNA提取
        2.2.18 RNA的反转录
        2.2.19 Real-time PCR检测基因的表达水平
        2.2.20 水稻的接种实验
3 结果与分析
    3.1 水稻过表达载体的构建
    3.2 生物信息学分析
    3.3 OsAOS2的亚细胞定位
    3.4 过表达水稻的获得
    3.5 过表达水稻的验证
        3.5.1 OsLOX4过表达水稻的筛选
        3.5.2 OsAOS2过表达水稻的筛选
    3.6 lox3接种稻瘟病菌后相关基因的表达
4 结论与讨论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3919761