油菜转录因子BnaERF5/6的功能验证及5-羟色胺对幼苗干旱缓解效应的相关研究

发布时间：2024-05-21 23:48

　　一、油菜转录因子Bna ERF5/6的功能验证本研究选用耐渍型油菜品种中双9号,以淹水处理12小时的油菜芽的c DNA为模板,克隆与耐渍相关的基因Bna ERF5、Bna ERF6,并用农杆菌介导法遗传转化拟南芥。通过淹水处理,验证拟南芥的表型。主要结果如下:克隆到2个与耐渍相关的基因Bna ERF5、Bna ERF6,并且成功构建植物过表达载体PBI121-Bna ERF5、PBI121-Bna ERF6。通过农杆菌介导法遗传转化拟南芥,经过连续三代在卡那霉素培养基的筛选、阳性苗DNA检测以及纯系植株q PCR检测外源基因的表达量等一系列检测,得到Bna ERF5、Bna ERF6这2个基因的过表达拟南芥纯合株系。对转基因和野生型拟南芥株系进行淹水处理,淹水后拟南芥的叶片均变黄,恢复后拟南芥的部分叶片呈紫色,部分老叶片干枯;在淹水7天恢复10天后,转基因植株基本可以正常开花,而野生型植株矮小,发育迟缓,不能正常开花。对淹水0h、3h、6h、9h拟南芥中耐渍基因ADH1、PDC1的表达量检测发现,超表达Bna ERF5拟南芥中ADH1基因在淹水处理0h、3h的表达量均较野生型提高,在淹...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1pEASY-BluntSimple克隆载体结构图

学位论文第一部分油菜转录因子ERF的功能验证C反应5分钟。反应结束后放在冰上。取到50μLDH5α感受态细胞中混匀。冰水浴20分钟。1min30s以后，放在冰上2分钟。B培养基。180rpm、37oC震荡培养40分钟。1分钟，倒掉部分上清....

图2.2PBI121表达载体结构图

酶切切体系：质粒30μl，酶XbaI2μl，酶SmaI2μl，Buffer10μl，水56μl，共100μl，2，37oC酶切3个小时，加入20μlLoadingBuffer，用移液枪吸打混匀后琼脂糖凝胶收有目的条带的片段。回收酶切后的质粒收集管里放入吸附....

图3.1BnaERF5/6基因cDNA编码序列的扩增结果示意图

图3.1BnaERF5/6基因cDNA编码序列的扩增结果示SchematicdiagramoftheamplificationresultoftheBnaERF5/6RANS2KBPLUSMarker(全式金);1为BnaERF5基因PCR....

图3.2导入PBI121-BnaERF5/6质粒的农杆菌PCR鉴定示意图

3.2导入PBI121-BnaERF5/6质粒的农杆菌aticdiagramofagrobacteriumPCRwithPBI1S2KBPLUSMarker;1均为单克隆的PCR产物，2为r;1:ProductionofPCR,2:CK....

本文编号：3980092