基于核酸序列依赖性扩增技术的玉米转基因成分Bar的鉴定

发布时间：2024-11-26 21:57

　　 为了开发高灵敏度、高特异性且易于普及的玉米转抗草丁膦抗性Bialaphos resistance(Bar)基因的鉴定方法,采用核酸序列依赖性扩增(Nucleic Acid Sequence-based Amplification,NASBA)技术,根据转基因成分Bar基因的mRNA序列,设计合成Bar基因的检测特异引物和探针,通过优化NASBA扩增反应程序和产物检测体系,开发不依赖核酸扩增仪的转基因成分Bar的分子检测试剂盒,短时间内对转基因成分Bar进行高灵敏度筛查。结果表明,检测特异性好且灵敏度高,其灵敏度可达6 fg,样本检测也说明试剂盒具有较高灵敏度和特异性,且适合基层部门和采样现场对Bar转基因成分的早期鉴定。

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【部分图文】：

图1 Bar-NASBA试剂盒对Bar的检测特异性

为探索检测体系的最低检出限,实验将原浓度为600ng·μL-1转Bar基因的玉米的RNA做连续的梯度稀释,浓度梯度范围见表1:从1×10-1ng·μL-1至1×10-8ng·μL-1。对稀释后的RNA样品进行NASBA反应,NASBA反应产物的电泳结果证明,模板浓度稀释至10....

图2 Bar-NASBA试剂盒的检测灵敏性

电泳结果也表明,检测浓度可达到1×10-8ng·μL-1,浓度为1×10-9ng·μL-1时显示为阴性(结果未给出),由此可见,该反应体系具有较高的灵敏性可达fg级别,且阴性对照无扩增信号(图2)。3.3Bar-NASBA检测试剂盒样本检测结果

图3 Bar-NASBA试剂盒的样本检测

采用Bar-NASBA试剂盒分别对普通玉米与转Bar玉米取茎叶片、玉米茎和玉米根总RNA检测,结果:转Bar基因玉米相关样品均显阳性,表明试剂盒应用于转Bar基因的玉米各组织检测具有较高灵敏度和特异性(图3)。3.4Bar-NASBA检测试剂盒的稳定性和保存期结果

本文编号：4012645