TaCYP78A5基因的原核表达及转基因小麦后代鉴定分析

发布时间：2024-11-27 21:24

　　小麦是世界上重要的粮食作物之一,其产量的提高对解决当今日益严重的粮食短缺问题起着至关重要的作用。细胞色素P450是植物中最大的蛋白家族之一,其中CYP78A是其重要成员之一,许多CYP78A亚家族成员已被鉴定出在种子生长发育过程中起着调节作用。本课题组通过同源克隆的方法分离得到TaCYP78A3和TaCYP78A5,并通过拟南芥的过表达和小麦BSMV-VIGS(大麦条斑花叶病毒诱导的基因沉默)证实其与籽粒大小有关。为进一步研究TaCYP78A5基因的功能,本研究开展了以下研究:(1)TaCYP78A5的原核表达和蛋白纯化利用生物信息学预测分析了TaCYP78A5氨基酸序列的结构及基本理化性质,分析结果显示该蛋白无信号肽,具有一个跨膜结构,是亲水蛋白。TaCYP78A5蛋白分子量为55.805 kD,理论pI值是8.32,共含有510个氨基酸,属于不稳定蛋白。去掉跨膜结构的截短体TaCYP78A5蛋白和截短体融合蛋白GST-TaCYP78A5的蛋白分子量分别为51.973 kD和80.385 kD,理论pI值分别为8.71和7.00。以植物表达载体pCAMBIA3301-TaCYP78A5...

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图2-1TaCYP78A5蛋白的信号肽分析

图2-1TaCYP78A5蛋白的信号肽分析Fig.2-1SignalpeptideanalysisofTaCYP78A5protein

图2-2TaCYP78A5蛋白的跨膜结构分析

图2-2TaCYP78A5蛋白的跨膜结构分析Fig.2-2AnalysisoftransmembranestructureofTaCYP78A5prote

图2-3TaCYP78A5蛋白的亲疏水性分析

图2-3TaCYP78A5蛋白的亲疏水性分析Fig.2-3AnalysisofhydrophobicityofTaCYP78A5protein性质分析aram对TaCYP78A5蛋白基本理化性质进行分析，结果5.805kD，理论pI值是8.32，共....

图2-4TaCYP78A5基因PCR扩增M.MarkerD2000；1-2.TaCYP78A5基因扩增产物

2-4TaCYP78A5基因PCR扩rD2000；1-2.TaCYP78A5基因PCRamplificationofTaCYP782000；1-2.PCRproductsofTaCR（图2-5A）鉴定为阳性

本文编号：4012707