盐度对黑鲷抗氧化系统的影响及杂交鲷鱼与亲本的脂肪酸成分比较

发布时间：2020-04-18 07:14

【摘要】：黑鲷是一种广盐性海产鱼,因其肉质鲜美抗病抗逆性强,现已成为我国海水养殖的重要经济鱼种之一。目前关于黑鲷盐度方面的研究主要集中于黑鲷仔、稚鱼在不同盐度下的存活、黑鲷低盐度池塘养殖等等宏观层面,对于黑鲷杂交育种方面的研究也有相关成功报道,并且有些杂交子代也表现出一定的优势性状,但关于黑鲷与真鲷杂交子代脂肪酸含量及成分有何优势还鲜有研究。本论文以黑鲷为实验对象,探究黑鲷在不同盐度处理下4种抗氧化酶活情况以及2个SOD基因和蛋白的表达情况,并对于黑鲷和真鲷及其正、反交子代的脂肪酸含量及成分进行比较分析,主要研究结果如下:(1)不同盐度下黑鲷抗氧化酶活及SOD基因和蛋白的表达情况通过对不同盐度(5、15、25、35和45盐度)处理下的黑鲷3种组织(肝脏、鳃和肾脏)进行超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽转硫酶(Glutathion S-transferases,GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidases,GPX)4种抗氧化酶活以及SOD蛋白进行时序表达分析。结果表明,黑鲷的四种抗氧化酶的酶活和SOD蛋白的表达量在不同盐度处理组中均有不同程度的变化,其中肝脏和鳃中的高盐组(盐度35、45)酶活与蛋白的表达量受盐度刺激变化要大于低盐组(盐度5、15)。并且对于盐度的应激反应多出现在6h和12h。自然海水(盐度25)中各时间段内抗氧化酶活力也有小幅度的变化,但总体而言比较稳定。此外,为进一步探究盐度对SOD基因的表达影响,综合上述实验结果选择不同盐度(盐度5、15和35)处理下的黑鲷3种组织(肝脏、鳃和肾脏)进行SOD、CAT、GPX和GST这4种抗氧化酶活和SOD基因进行时序表达模式分析。结果表明,黑鲷的4种抗氧化酶活和SOD基因的表达量并不一致,黑鲷4种抗氧化酶活力和SOD蛋白均表现出在高盐组受盐度影响而变化显著,而SOD基因的表达却表现出在低盐(盐度15)表达量显著高于其他实验组,且盐度过高(盐度35)或过低(盐度5)时CuZnSOD和MnSOD基因表达量变化不显著,甚至略有抑制。本研究对黑鲷不同盐度下抗氧化性的研究表明,黑鲷对盐度具有很强的耐受性,其中对低盐耐受性强于高盐组,在受到盐度刺激时抗氧化酶活基本在24h内能够通过自身调节恢复正常生存水平,但是对于SOD基因和蛋白造成的表达量上调或下降在120h以内并未恢复至正常水平。这对于盐度与抗氧化性能之间关系的研究提供了一定的参考资料也为黑鲷的低盐度池塘养殖提供了一定的理论依据。(2)黑鲷与真鲷及其正、反交子代粗脂肪含量及脂肪酸成分分析本研究采用索氏抽提法对黑鲷、真鲷及其正交、反交子代4种鲷鱼的肝脏、肌肉和鱼骨3种组织的粗脂肪和脂肪酸含量分别进行了测定,并利用气相色谱法对其脂肪酸的具体成分进行分析。实验结果表明,正、反交子代均良好地继承了亲本真鲷的优势,脂肪含量明显高于亲本黑鲷,且以肝脏中最为显著。杂交后代与亲代的饱和脂肪酸成分组成情况基本吻合,并且在杂交后代中检测到了 C22:0、C24:0等几种亲代脂肪酸成分中未检测到的脂肪酸,说明杂交后代脂肪酸组成更丰富。杂交后代的不饱和脂肪酸组成与黑鲷亲本基本相同,尤其体现在肝脏组成上。杂交后代的这一优势性状对于黑鲷的杂交育种和子代的养殖推广提供了一定的理论依据。本论文结果为进一步了解不同盐度对黑鲷抗氧化分子调控机理提供一定的理论依据,并为黑鲷适宜养殖环境的选择和杂交黑鲷的养殖推广提供一定的理论基础。
【图文】：

氧化应激,抗氧化系统,过氧化氢酶,抗氧化酶

将超氧阴离子自由基快速歧化为过氧化氢和分子氧；过氧化氢在过氧化氢酶、逡逑谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽过氧化物转移酶的共同作用下转化为水和分子逡逑氧。目前关于鱼类抗氧化系统的氧化应激通路己有较深入认识（图１－１）邋［２５］，但逡逑对于不同鱼种的氧化应激反应差异还了解较少。逡逑超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是生物体内最主要的一类抗氧化物酶，构成了机体逡逑免疫防御系统的首道防线。通过催化作用，使超氧阴离子分解为0２和Ｈ２０２来消逡逑除因外界刺激而产生的过多的氧自由基（ＲＯＳ），使生物体免受损伤。１９３８年逡逑Ｍａｎｎ邋＆邋Ｋｅｉｌｉｎ邋［２６］首次从牛红细胞中分离出一种蓝色的含铜蛋白质逡逑（Ｈｅｍｏｃｕｐｒｅｉｎ），１９６９年Ｍｃｃｏｒｄ等［２７］发现该蛋白具有催化超氧化物阴离子的逡逑功能，并能使超氧化物阴离子发生歧化反应，，故将此酶命名为超氧化物歧化酶逡逑（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ邋Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）。ＳＯＤ是一类清除自由基的蛋白酶，对需氧生物的生逡逑存起着重要的作用，是生物体防御氧毒性的关键。Ｗｉｎｓｔｏｎ等［２８］的研宄发现，当逡逑２逡逑

黑鲷,蛋白表达,低盐,低盐度

逑２．４．２不同盐度对黑期ＳＯＤ蛋白的影响逡逑如图２－３所示，黑鲷在受到低盐度胁迫时，低盐度组５和１５的ＣｕＺｕＳＯＤ逡逑和ＭｎＳＯＤ蛋白的相对表达量变化并不完全一致。图２－３Ａ所示，低盐度组的盐逡逑度５和盐度１５处理下鱼体肝脏中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白分别在１２ｈ和６ｈ蛋白表达显逡逑著下降，到１２０邋ｈ盐度１５时处理组ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白表达仍显著低于对照组，逡逑ＭｎＳＯＤ蛋白在低盐度组盐度５和盐度１５时蛋白表达量均有增加，且在１２０邋ｈ仍逡逑显著高于对照组。图２－３Ｂ所示，鳃中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白在低盐度组盐度５时蛋白逡逑表达量在６邋ｈ显著增加，１２邋ｈ又显著减少直至１２０邋ｈ仍显著低于对照组，而低盐逡逑度组盐度１５时在６邋ｈ和１２邋ｈ邋ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白表达量显著下降，但于１２０邋ｈ又增加逡逑至与对照组表达量相当。ＭｎＳＯＤ蛋白在低盐度组盐度５和盐度１５时蛋白表达逡逑量在６ｈ和１２邋ｈ均显著减少，于１２０邋ｈ又增加且显著高于对照组。图２－３Ｃ所示，逡逑肾脏中ＣｕＺｎＳＯＤ蛋白在低盐度组盐度５时蛋白表达量均显著增加
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S917.4

【参考文献】