鲤春病毒血症病毒M单克隆抗体的制备及鲤天然免疫蛋白TRIM32特性初步研究

发布时间：2020-04-29 09:03

【摘要】：鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC)是一种急性出血性高度传染性的病毒病,一般在春季大规模爆发,主要感染鲤科鱼类,其中以鲤为主要感染对象。患病的幼鱼死亡率高达30%-70%,是世界动物卫生组织规定的必须申报的动物疫病。该病最早在欧洲爆发,并引起了严重的经济损失。虽然目前,在我国该病还没有大规模爆发的报道。但已有相关文献指出,在中东、美国、巴西、加拿大以及我国均有检测到SVC的病原鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)。为了更清楚的了解SVCV致病机制,为该病的预防和治疗奠定良好基础,本研究主要做了以下两方面工作:1.SVCV M单克隆抗体的制备利用PCR方法扩增SVCV基质蛋白M的ORF区,将扩增产物克隆至原核表达载体pGEX-KG中,构建重组质粒SVCV-M-KG。原核表达SVCV/M-KG融合蛋白,并用纯化的融合蛋白免疫4周龄BALB/c雌鼠,4次免疫后,在融合剂聚乙二醇的作用下,将小白鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合,并最终筛选出1株单克隆抗体5A1。间接免疫荧光和免疫印记实验证明该抗体可以特异性识别SVCV/M蛋白,进一步分析得知,该抗体与M蛋白的相互作用位点位于M基因第337bp至522bp之间。对所获得单克隆抗体进行亚型分析可知,其属于IgG2b亚型,轻链为κ链。2.鲤天然免疫蛋白TRIM32初步研究参照斑马鱼、罗非鱼等已知的TRIM32基因序列,设计随机引物扩增鲤TRIM32基因核心片段,通过RACE方法进一步获得鲤TRIM32 ORF区,并对该序列进行同源性、遗传进化等生物学分析。最终结果显示,鲤TRIM32具有较高的保守性,其与模式生物斑马鱼的同源性为93%,遗传进化树分析将斑马鱼和鲤的TRIM32聚为一支。SVCV M蛋白单克隆抗体和TRIM32蛋白初步研究,为进一步研究SVCV的致病机理和防治方法奠定了基础。
【图文】：

单克隆抗体的产生Fig1：Theproductionofmonoclonalantibodies(来自互联网)

图 2:TRIM 蛋白结构域组成Fig2:The domains of TRIM proteinsRicardo Rajsbaum et al.,2014Ricardo Rajsbaum et al.,2014图 3:TRIM 蛋白 E3 泛素连接酶活性Fig3:TRIM proteins as E3 Ubiquitligase
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S943

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 孔君;刘箐;韩跃武;王天昌;刘金芝;;单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景[J];免疫学杂志;2011年02期

2 王传武,赵德明;用实验动物制备多克隆抗体Ⅰ.免疫方案的优化[J];实验动物科学与管理;2002年04期

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本文编号：2644400