基于核糖体序列的眼点淀粉卵甲藻和刺激隐核虫的分类学分析与检测

发布时间：2020-05-02 16:11

【摘要】：眼点淀粉卵甲藻和刺激隐核虫是大黄鱼养殖过程中常见的寄生虫病,常常引起疾病的爆发并造成大量的经济损失。本文以大黄鱼为实验对象,确定了获取成熟眼点淀粉卵甲藻营养体的实验方法。在观察眼点淀粉卵甲藻生活史过程中,厘清了眼点淀粉卵甲藻在大黄鱼上的生活史过程,同时确定了眼点淀粉卵甲藻胞囊直径与子细胞数量以及与涡孢子之间的数量关系并进一步确定了涡孢子的寿命。将大黄鱼分18.14±5.21g、72.14±16.64g两种体重,分别确定两种鱼的致死量。确定了 18.14±5.21g大黄鱼的半数致死量,同时估测眼点淀粉卵甲藻涡孢子对72.14±16.64g大黄鱼的成功感染并发育成胞囊比例。初步确定了眼点淀粉卵甲藻对大黄鱼的毒力。因两种寄生虫分类学位置发生多次改变,至今仍有疑问,同时两种寄生虫的防控仍难以有效解决。本文克隆了眼点淀粉卵甲藻18S/ITS1/5.8S/ITS2/28S全长基因并通过18S,28S序列对其亲缘性进行了分析。克隆了刺激隐核虫18S/ITS1/5.8S/ITS2/28S/IGS全长基因并通过18S,28S序列对其亲缘性进行了分析。同时通过IGS序列对4株刺激隐核虫的亲缘性进行了分析。为了便于检测眼点淀粉卵甲藻和刺激隐核虫,本文分别在在核糖体不同基因区域设计两对引物。在眼点淀粉卵甲藻18S序列的上游的5'ETS序列中以及ITS2序列中,设计特异性引物检测眼点淀粉卵甲藻涡孢子和营养体。2对引物对涡孢子的灵敏度为32个。而25-40μm的营养体灵敏度为1个,难以检测直径超过60μm的营养体。在刺激隐核虫28S序以及IGS序列中,设计特异性引物检测刺激隐核虫幼虫和滋养体。2对引物对幼虫和滋养体高度灵敏,1个幼虫可以通过PCR方法得到检测。不同大小的滋养体(80-420μm)RCR检测的灵敏度与幼虫检测结果相同,都为1个虫体。两对引物具有种属特异性,适合做PCR检测引物。
【图文】：

甲藻,眼点,淀粉,海水鱼

逡逑图１－１邋ＡｌｇａｅＢａｓｅ数据库中眼点淀粉卵甲藻分类学位置逡逑Ｆｉｇ，邋１－１邋ｔａｘｏｎｏｍｉｃ邋ｓｔａｔｕｓ邋ｏｆ邋Ａｍｙｌｏｏｄｉｎｉｕｍ邋ｏｃｅｌｌａｔｕｍ邋ｉｎ邋ＡｌｇａｅＢａｓｅ逡逑Ｂｉｏｔａ邋＋逡逑Ｃｈｒｏｍｉｓｔａ邋＋逡逑Ｈａｒｏｓａ邋＋逡逑Ａｌｖｅｏ邋ｌａｔａ邋Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ邋＋逡逑Ｍｙｚｏｚｏａ邋Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ邋＆邋Ｃｈａｏ邋＋逡逑Ｄｉｎｏｚｏａ邋＋逡逑Ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔａ邋＋逡逑Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ邋Ｆｒｉｔｓｃｈ，邋１９２７邋＋逡逑Ｂｌａｓｔｏｄｉｎｉａｌｅｓ邋Ｃｈａｔｔｏｎ－ｉ－逡逑Ｏｏｄｉｎｉａｃｅａｅ邋＋逡逑Ａｍｙｌｏｏｄｉｎｉｕｍ邋Ｅ．邋Ｂｒｏｗｎ邋ｅｔ邋Ｈｏｖａｓｓｅ，邋１９４６逡逑图ｉ－２邋ｗｏｒｍｓ数据库中眼点淀粉卵甲藻分类学位置逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋ｔａｘｏｎｏｍｉｃ邋ｓｔａｔｕｓ邋Ａｍｙｌｏｏｄｉｎｉｕｍ邋ｏｃｅｌｌａｔｕｍ邋ｉｎ邋ＷｏＲＭＳ逡逑眼点淀粉卵甲藻与嗜酸性卵甲藻（Ｏｏｄｉｎｉｕｍ邋ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ邋Ｎｉｅ）由于形态学逡逑和病理学表现高度相似而容易被人混靖。Ｗｏｒｍｓ将这两种病原都归为胚沟科，逡逑嗜酸卵甲藻属于卵涡鞭虫属或卵甲藻属（Ｏｏｄｉｎｉｕｍ）。眼点淀粉卵甲藻被称作逡逑海洋天鹅绒病，而嗜酸性卵甲藻被称作淡水天鹅绒病、淡水鱼胡椒病、打粉病等。逡逑ＡｌｇａｅＢａｓｅ记载的淡水卵祸鞭虫只有两种，沼泽卵圆鞭毛虫（Ｐｉｓｃｉｎｏｏｄｉｎｉｕｍ逡逑ｌｉｍｎｅｔｉｃｕｍ）与柱状卵圆鞭毛虫（Ｐｉｓｃｉｎｏｏｄｉｎｉｕｍ邋ｐｉｌｌｕｌａｒｅ），，通过对文献中的记录分逡逑析比较

序列,串联重复,结构示意图,亲缘关系分析

逦福建农林大学博士学位论文逦逡逑ｒＤＮＡ已广泛用于分类鉴定与检测。ＩＴＳ由于不参与核糖体的形成，生物功能低，逡逑变异较快。常用ＩＴＳ序列作为种见或属间物种亲缘关系分析［９１１。ＩＧＳ进化速度逡逑比ＩＴＳ更快且所含信息量大，具有高度的特异性。适合种间或种内亲缘关系分析逡逑或分子生物学检测。需要特别指出的是，没有一个简单的基因就可以提供的完备逡逑的分子进化信息，必须通过不同的的序列得到不同的发育树来分析相互佐证１９２］。逡逑为得到更为准确的发育树，需要对多个基因或大量ＤＮＡ序列进行分析Ｉ９３Ｌ逡逑ＮＴＳ逦ＮＴＳ逡逑
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.5

【参考文献】