大黄鱼凝集素galectin-9和Nattectin-like的功能研究
发布时间：2020-05-18 14:32
【摘要】：凝集素是可以特异性结合糖类的模式识别受体,在先天性免疫中发挥着重要作用。本研究从已构建的大黄鱼(Larimichthys crocea)转录组数据库中筛选出两种凝集素基因,galectin-9和Nattectin-like新型C-型凝集素,分别命名为LcGal-9和LcNTC,并对它们的免疫功能进行了研究,得到的结果如下:LcGal-9是一种半乳糖凝集素,其cDNA全长1496 bp,开放阅读框(ORF)978 bp,编码325个氨基酸。LcGal-9不具有信号肽和跨膜区,含有两个由短肽相连的CRD结构域,每个CRD均含有两个保守的糖结合位点H-NPR和WG-EE-。系统进化分析发现,LcGal-9与雀鲷(Stegastes partitus)等鱼类的galectin-9聚为一支。qRT-PCR分析表明,LcGal-9 mRNA广泛分布于大黄鱼的各种组织,其中在肝脏中的表达量最高。Western blot结果显示,肝脏、脾脏、肠道等组织中LcGal-9蛋白的含量丰富,而在肌肉和血浆中没有检测到LcGal-9蛋白。PolyI:C刺激后,肝脏、脾脏和头肾中的LcGal-9 mRNA在多个时相均显著上调;相反,LPS和副溶血弧菌刺激后,LcGal-9在三种组织中的表达量普遍下调。刺激隐核虫感染后,鳃、皮肤、脾脏和头肾中的LcGal-9在感染初期均明显升高。体外重组表达的LcGal-9(r LcGal-9)具有不依赖Ca2+的生物学活性,不仅可以凝集人、家兔和大黄鱼的红细胞,对革兰氏阴性菌溶藻弧菌和嗜水气单胞菌也具有凝集作用。α-乳糖和LPS能抑制r LcGal-9的凝血活性。免疫组化结果表明,PolyI:C和副溶血弧菌刺激后,脾脏中LcGal-9蛋白量增加。以上结果为研究LcGal-9在大黄鱼先天免疫应答中作用提供了依据。LcNTC属于C-型凝集素家族,其cDNA全长859 bp,开放阅读框(ORF)465 bp,编码154个氨基酸。LcNTC的N端有一个信号肽和一个跨膜区,C端含有一个CRD结构域,其中含有甘露糖结合位点EPN和四个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统分析表明,LcNTC与鱼类C-型凝集素和多种Nattectin-like蛋白具有较近的亲缘关系。LcNTC mRNA在大黄鱼各组织中均有表达,其中鳃中的表达量最高。LPS、PolyI:C和副溶血弧菌刺激后,肝脏、脾脏和头肾中LcNTC的表达量在不同时相显著升高。刺激隐核虫感染后,鳃、皮肤、脾脏和头肾中LcNTC也呈现出不同程度的上调。体外重组表达的LcNTC(rLcNTC)具有Ca2+依赖性的凝集活性,可以凝集人、家兔和大黄鱼的红细胞,甘露糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖和LPS对rLcNTC的红细胞凝集活性均具有抑制作用。此外,rLcNTC对多种革兰氏阳性菌和阴性菌均表现出较强的凝集效果。上述研究结果表明,LcNTC可能作为重要的模式识别受体,参与了大黄鱼对细菌、病毒和寄生虫的免疫防御。
【图文】：
图 1-1 半乳糖凝集素的分类及糖类识别[40]g. 1-1 Galectin classification and recognition to carbohydrate集素的功能公认的多功能免疫分子，其功能涉及细胞粘附和8]，抗肿瘤免疫应答[49]等。更重要的是，，它可作为病原相关分子模式（PAMPs），参与先天性免疫entrarchus labrax）[51]和牙鲆（Paralichthys olivac免疫功能。从海鳗（Conger myriaster）中分离出[53]。此外，敲除 galectin-1 后斑马鱼（Danio rerio研究结果均表明，galectin 参与鱼类免疫防御与发素的结构与分类类凝集活性依赖于 Ca2+的凝集素超家族，至少含
图 1-2 C-型凝集素的空间结构[55]Fig. 1-2 The spatial structure of C-type lectin[5能可参与多种免疫反应，例如病原识别[5]。C-型凝集素以可溶性蛋白和跨膜蛋ing lectin，MBL）即为一种可溶性 C-型BL 含有 6 个 CRD，CRD 末端可识别 位和第 4 位羟基（图 1-3）。树突状细endritic cell-specific intercellular ad巨噬细胞半乳糖型 C 型凝集素（Macr-型凝集素，两者在病原识别和细胞间信香鱼（Plecoglossus altivelis）[65]、半滑舌odon idella）[67]、点带石斑鱼（Epinep集素，并验证了它们体外抗菌和抗病
【学位授予单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
本文编号：2669869
【图文】：
图 1-1 半乳糖凝集素的分类及糖类识别[40]g. 1-1 Galectin classification and recognition to carbohydrate集素的功能公认的多功能免疫分子，其功能涉及细胞粘附和8]，抗肿瘤免疫应答[49]等。更重要的是，，它可作为病原相关分子模式（PAMPs），参与先天性免疫entrarchus labrax）[51]和牙鲆（Paralichthys olivac免疫功能。从海鳗（Conger myriaster）中分离出[53]。此外，敲除 galectin-1 后斑马鱼（Danio rerio研究结果均表明，galectin 参与鱼类免疫防御与发素的结构与分类类凝集活性依赖于 Ca2+的凝集素超家族，至少含
图 1-2 C-型凝集素的空间结构[55]Fig. 1-2 The spatial structure of C-type lectin[5能可参与多种免疫反应，例如病原识别[5]。C-型凝集素以可溶性蛋白和跨膜蛋ing lectin，MBL）即为一种可溶性 C-型BL 含有 6 个 CRD，CRD 末端可识别 位和第 4 位羟基（图 1-3）。树突状细endritic cell-specific intercellular ad巨噬细胞半乳糖型 C 型凝集素（Macr-型凝集素，两者在病原识别和细胞间信香鱼（Plecoglossus altivelis）[65]、半滑舌odon idella）[67]、点带石斑鱼（Epinep集素，并验证了它们体外抗菌和抗病
【学位授予单位】：集美大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
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1 吕常欢;大黄鱼凝集素galectin-9和Nattectin-like的功能研究[D];集美大学;2016年
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本文编号：2669869
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