青虾卵黄蛋白原和卵黄蛋白原受体基因的克隆及功能研究

发布时间：2020-06-05 19:00

【摘要】：青虾学名日本沼虾(Macrobrachium nipponensis)俗称河虾,广泛分布在我国淡水水域。属于节肢动物门(Arthropoda),甲壳纲(Crustacea),十足目(Decapoda),长臂虾科(Palaemonidae)、沼虾属(Macrobrachium)。近年来,随着青虾养殖产业的规模化扩大、年产量的提高,在生产中出现了一系列亟待解决的难题,其中青虾个体小型化"性早熟"问题最为突出。在养殖池塘中小虾性腺过早成熟产卵,导致青虾个体变小、池塘养殖密度过大、多代同堂等一系列问题,制约着青虾产业的可持续健康发展。性腺的成熟与生殖调控基因密切相关,参与生殖调控的基因很多,其中卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)和卵黄蛋白原受体(Vitellogeninreceptor,VgR)在卵子发生过程中起着十分关键的作用。目前,在青虾中曾经克隆了 Vg基因的短片段,但对于其功能研究还未见报道,关于VgR基因的研究还十分薄弱。本研究以青虾为研究对象,拟开展卵黄蛋白原基因和卵黄蛋白原受体基因的研究,根据实验室已构建的精卵巢文库获取的基因短片段,采用cDNA末端快速扩增(Rapid AnplificationofcDNA Ends,RACE)技术克隆获得了 Vg基因和VgR基因的全长cDNA序列,并研究了在不同组织、成体不同发育时期、卵巢不同发育时期的表达规律;与此同时,通过眼柄摘除和RNAi,研究了 Mn-VgR和Mn-Vg基因的功能以及在卵子发生过程中之间的相互调控关系。采用RACE技术获得青虾Vg基因的全长cDNA序列全长约7804bp,ORF共编码2536个氨基酸残基,蛋白分子量为286.810kDa,荧光定量结果表明,Mn-Vg基因在雌虾的肝胰腺、血淋巴和卵巢中高表达,其中肝脏表达量最高。在雄虾的各个组织基本不表达。Mn-Vg在胚胎发育的原肠期和n炞从滋迤诒泶锪拷细摺Ｔ诔瞿さ谝惶毂泶锪看锏椒逯，

本文编号：2698473