miRNA-200-cbx2在牙鲆性腺中的表达与功能研究

发布时间：2020-06-06 15:56

【摘要】：牙鲆(Paralichthys olivaceus)是一种重要的海水经济鱼类,雌性个体较雄性个体生长快,在生产上雌鱼饲养周期较短,因而具有很高的经济价值。性别分化与性腺发育一直是鱼类发育和繁殖生物学研究的重要方向。近年来,越来越多的研究表明miRNA在脊椎动物发育和生殖中发挥重要作用。我们在先前的研究中意外发现色素框同源物2(chromobox homolog 2,CBX2)是牙鲆雌雄性腺差异表达的miR-200家族作用的潜在靶基因。CBX2是多梳蛋白(Polycomb group complex,PcG)家族的关键成员之一,它作为重要的转录因子在哺乳动物的性发育中发挥着关键作用。如果该基因突变或功能缺失将导致性反转,但关于CBX2在除哺乳动物外的其他脊椎动物性别分化与性腺发育中的功能,至今尚不清楚。因而本研究在牙鲆中鉴定了cbx2基因,并采用多种分子生物学技术分析了其表达谱以及其与miR-200家族与多个性别相关基因的作用关系,为揭示miRNA通过调节cbx2基因表达而参与牙鲆性腺发育的分子机制奠定基础。本研究利用分子克隆技术克隆了牙鲆cbx2基因的cDNA序列,该cDNA序列含有1 584bp的开放阅读框,编码527个氨基酸;运用生物信息学方法分析牙鲆CBX2蛋白质的理化性质与空间结构,结果显示蛋白质分子量和等电点分别为56578.98和10.03,是一种亲水性蛋白,且偏碱性,该蛋白无信号肽,无跨膜区域,且编码该蛋白的氨基酸中以丝氨酸(Sr)的含量为最高;其二级结构中含有1个染色质结构域和4个低复杂结构域,该染色质结构域常结合甲基化氨基酸残基;空间结构分析发现,牙鲆CBX2蛋白以α螺旋和无规则卷曲为主;并比较了脊椎动物中cbx2的基因结构、氨基酸同源性、系统进化,表明cbx2基因在脊椎动物进化中较为保守,牙鲆cbx2与尼罗罗非鱼与青溕的基因结构更为相似,其氨基酸同源性与杜氏，

本文编号：2699919