饲喂类固醇激素对中华鳖稚鳖生长、血清性激素及性腺发育的影响

发布时间：2020-06-12 17:43

【摘要】：中华鳖(Pelodiscus sinensis)属于爬行纲(Reptilia),龟鳖目(Testudines),鳖科(Trionychidae),鳖属(Pelodiscus),是我国重要的特种经济水产动物之一,其雌雄间生长具有较大差异,性成熟后同龄雄鳖的体重约为雌鳖的1.5-2倍。性激素是性别分化、发育过程中的关键因素,影响着性分化的方向。本研究通过在稚鳖饲料中添加一定剂量的类固醇激素,分析经短期连续饲喂后,激素对稚鳖各生长指标、血清激素含量及性腺发育的影响,研究结果如下:1、性类固醇激素处理对中华鳖稚鳖生存及生长的影响(1)不同剂量雌二醇处理后对稚鳖的存活率无显著影响,而甲基睾酮不同剂量处理均显著降低了稚鳖的存活率;(2)不同剂量雌二醇处理组中,20 mg/kg剂量组稚鳖体重、背甲长及背甲宽的相对生长率与对照组无显著差异(P0.05),其余各剂量组均使稚鳖体重、背甲长及背甲宽的相对生长率显著下降(P0.05),表现为对稚鳖生长的抑制;(3)不同剂量甲基睾酮处理组均表现出使稚鳖体重、背甲长、背甲宽相对生长率的显著下降效应(P0.05);(4)不同剂量的两种激素对稚鳖尾长的增长均有显著的促进作用,其中甲基睾酮作用更明显(P0.05)。2、性类固醇激素处理对中华鳖稚鳖血清性激素及性腺发育的影响采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量雌二醇及甲基睾酮处理后的稚鳖血清中E_2、T含量,结果显示:(1)不同剂量雌二醇处理均使稚鳖血清中E_2含量显著升高(P0.05),T含量有一定程度的降低;(2)不同剂量甲基睾酮处理均使稚鳖血清中T含量显著升高(P0.05),同时E_2含量也显著上升(P0.05);(3)观察经不同剂量性类固醇激素处理后的性腺切片,发现雌二醇能促进卵巢的发育,卵径及卵原细胞数目均大于对照组,而甲基睾酮处理则相反;(4)稚鳖期中华鳖精巢发育缓慢,本实验中未观察到两种激素对精巢发育有明显的影响。3、中华鳖GnRH 1基因的克隆及表达特征分析以中华鳖成鳖全脑组织RNA为模板,使用末端快速扩增技术(RACE)得到中华鳖GnRH 1基因cDNA全长序列,并运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了GnRH 1的表达特征。结果显示:(1)中华鳖GnRH 1基因cDNA全长546 bp,其中开放阅读框(ORF)279 bp,编码92个氨基酸;(2)系统进化树结果显示,中华鳖GnRH 1基因和绿海龟、墨西哥箱龟及西部颈龟GnRH 1基因聚为一支,亲缘关系较近;(3)生物信息学分析可知GnRH 1基因编码蛋白为分泌蛋白,具有信号肽;(4)qRT-PCR结果表明,中华鳖GnRH 1基因在检测的雌雄成鳖8个组织中均表达,且在脑和性腺组织中高表达(P0.05);在胚胎发育时期随发育时间的后移,表达量显著增高(P0.05)。研究表明GnRH 1基因可能在中华鳖生长及性腺分化中具有重要作用。
【图文】：

曲线,雌二醇,曲线,标准曲线

采用 ELISA 方法检测激素含量，需先利用试剂盒中的标准品建立标准曲线soft Excel 绘制标准品线性回归曲线，以标准品浓度为横坐标，将实验测得度值作纵坐标，得出方程 y=ax+b 及相关系数 R2，通过相关系数判定拟合方；当建立的回归方程式的相关系数 R2大于 0.99 时，符合标准曲线构建要求续试验；各样本浓度值可通过拟合得到的回归曲线方程计算得出。2.1.1雌二醇标准曲线标准品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、64pmol/L，根据 ELISA 实仪测定对应的 OD 值，得到标准曲线（图 3-1，A）。其中得到回归方程为 y=0527，相关系数 R2为 0.9961，符合测定要求。2.1.2睾酮标准曲线准品（S0-S5）浓度依次为：0、20、40、80、160、320pg/mL，根据 ELISA 标仪测定对应的 OD 值，结果得到标准曲线（图 3-1，B）。其中得到回归方程76x + 0.1005，相关系数 R2为 0.9915，符合测定要求。

中华鳖,吸光度比值,引物,基因

1基因 mRNA 在胚胎发育过程中的表达分析引物 qGnRH 1 和内参引物 18S rRNA 检测 GnRH 1 基因胚胎发育的第 8 期、第 10 期至第 18 期共 10 个时期胚胎取样以 Tokita[132]的分期标准为参照，实验参照 2.4.6.2 分析测各组织 RNA，其吸光度比值均分布在 2.0 附近，达到泳检测，可得 28S 和 18S 两条清晰的带，且 28S 条带条带几乎看不到，，说明提取 RNA 质量较好，符合下游实MM
【学位授予单位】：新疆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S917.4

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