南美白对虾中单一与混合的副溶血性弧菌生长行为比较研究

发布时间：2020-06-21 15:56

【摘要】：副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一种革兰氏阴性,是一种最常见的食源性病致病菌,广泛分布在海洋环境中。逐年递增的食品安全事件表明副溶血性弧菌目前已经成为水产品质量的最大威胁,所以,研究副溶血性弧菌预测模型及其生长行为对食源性致病菌株的风险评估以及水产品(虾)的货架期具有实际意义。本研究的主要内容及结果如下:1.胁迫温度下两株高致病性副溶血弧菌的生长差异比较分析。为比较胁迫温度下高致病性副溶血性弧菌的生长差异,本研究选用致病性副溶血性弧菌ATCC 33847(tlh+/tdh+/trh-)和F 18(tlh+/tdh+/trh-),测定其在南美白对虾上4~30℃的生长情况,采用修正一级模型拟合其生长曲线,并基于最优模型拟合得到的最大比生长速率(μmax)、延滞期(LT)比较分析两株菌的生长特性。结果表明,20~30℃时,两株副溶血性弧菌并未呈现出明显生长差异,而4~15℃时的生长差异较大。修正Gompertz模型为ATCC 33847和F 18在15~30℃的生长曲线的最优模型(R20.99),Baranyi模型为ATCC 33847在4~7℃以及F 18在7℃下最优模型(R20.935),而F 18在4℃和10℃的生长模型有待于进一步研究。15~30℃,F 18的μmax大于ATCC 33847,差值约从0.2增至0.8 Log10(cfu/m L)/h,ATCC 33847的LT大于F 18,差值从2.5 h变化到7 h。比较其他同类文献的μmax二级模型发现高致病性菌株存在显著性生长差异(P0.05),且差值随着温度的升高而变大。因此,胁迫温度下相同致病性副溶血性弧菌的生长存在较大的异质性,而结合微生物实际生活环境,建议考虑建立以混合菌株为研究对象的预测模型,为风险评估提供更准确的数据基础。2.致病性与非致病性副溶血性弧菌在南美白对虾上混合培养的生长行为致病性副溶血性弧菌,一个重要的食源性致病菌,在环境中与非致病性副溶血性弧菌株共存。然而,目前的副溶血性弧菌预测模型的研究通常专注于单一菌株,从不考虑致病性和非致病性细菌共存的局面。在本研究中,对四株副溶血性弧菌菌株(F18:tlh+/trh+/tdh-,ATCC17802:tlh+/trh+/tdh-,F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)等量混合后,在不同温度下(4,7,10,15,20,25和30℃)在即食南美白对虾中的生长行为进行了研究,细菌总数由微生物传统平板计数法得到。结果表明副溶血性弧菌混合菌株及其四个单菌株在15℃~30℃时呈现生长状态,在4℃~7℃时呈现死亡状态。而在10℃时,副溶血性弧菌混合菌株在初始100h是死亡状态,之后菌含量迅速增长,但是对于单一菌株,只有一个单菌株F18显示类似的生长趋势,而其他菌株一直是缓慢增长状态。与单菌株相比,混合菌株具有较高的最大生长速率和更短的延滞期,即具有更好的生存能力。上述结果表明,使用副溶血性弧菌菌株混合菌株建立的微生物预测模型,可能更加贴切细菌真实的生活环境,而这项研究也将为微生物预测模型的研究提供一个新的思路。3.PMA多重荧光定量PCR技术探究即食虾中不同基因型副溶血性弧菌在混合培养中的生长行为本研究成功构建了一种PMA多重荧光PCR方法,同时定量检测不同基因型副溶血性弧菌(F36:tlh+/trh-/tdh-,ATCC33847:tlh+/trh-/tdh+)在即食南美白对虾中的生长行为,并运用Baranyi模型拟合10℃时不同基因性副溶血性弧菌在即食虾中的生长数据。结果表明10℃时不同基因型副溶血性弧菌混合菌株在即食虾上呈现生长状态,ATCC33847的最大比生长速率(μmax)为3.559±0.666 Log(CFU/m L)/d,F36的是2.999±0.415 Log(CFU/m L)/d;ATCC33847的延滞期(LT)为2.778±0.138d;F36的是2.826±0.146d。这表明混合菌株中致病性菌株在即食虾上比非致病性菌株生长能力要好。这一结果为研究副溶血性弧菌混合菌株的生长行为提供了有效的数据基础。
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S945.49
【图文】：

曲线,副溶血性弧菌,混合菌株,单菌株

30℃条件下副溶血性弧菌混合菌株及其单菌株在即食values of μmaxof four V. parahemolyticus strains and their shrimp from 15 -30oC.示，副溶血性弧菌混合菌株及其单菌株在 15℃着温度变化的关系曲线。所测温度对不同单菌株不同菌株之间的 CV 值不尽相同，但是都超过条件对致病性和非致病性副溶血性弧菌的影响 CV 值相比，在 15℃~30℃条件下，混合菌株的 0.2。据现有的调查与研究表明，温度变化对副V 值具有直接影响，相对于最佳生长条件，单菌强的应变能力[58,83,107]，这也表明，目前调查研有可能低估了副溶血性弧菌的风险值，而未来基确性以及参考价值更高，至少由于 CV 值得不稳有待于进一步完善。下的失活行为

标准曲线,多重,反应条件

Taq DNA 聚合酶 0.2010μM primer 0.5 10μM probe 0.20DNA 模板 1.0 ddH2O 12.5多重 Real-time PCR 的反应条件：本研究多重 Real-time PCR 扩增条件如图4-1 所示。在 7500 Fast Real-time PCR system 中进行扩增实验，并使用 7500Software v2.0.6 软件分析相关数据，该软件在 Applied Biosystems 公司的官方网站上下载。图 4-1 多重 Real-time PCR 的反应条件Fig.4-1 The reaction condition used for multiple Real-time PCR2.6 PMA 多重 Real-time PCR 标准曲线的构建本实验构建标准曲线时，采用人工接种的虾样。具体的实验操作如下：解冻

【引证文献】