达氏鳇热休克蛋白70和90基因的克隆及其对温盐胁迫的响应

发布时间：2020-06-21 15:47

【摘要】：达氏鳇自然种群是生活于我国黑龙江及其流域的冷水性淡水鱼,属于鲟科鱼类,其个体大,抗病力强,性成熟晚,养殖目的主要是获取鱼子酱。目前,达氏鳇养殖群体已从寒冷的黑龙江南移至北京、河北、湖北、四川、重庆、云南等地,养殖温度逐渐升高,运输频率逐渐变大,达氏鳇面临着越来越严峻的生存考验。热休克蛋白(HSP)是生物体中重要的应激蛋白,它对保持机体内环境稳态方面有突出的作用。本文的主要目的是研究热休克蛋白在帮助达氏鳇应对严峻环境挑战时做出的调控方式,以期为达氏鳇在养殖和运输方面提供理论支持,旨在为保护达氏鳇人工种群提供理论依据。本文采用同源克隆法和末端快速扩增(RACE)技术克隆了达氏鳇HSP70和HSP90基因全长序列,并设计5个温度梯度(4℃、10℃、16℃、25℃、28℃)和5个盐度梯度(0ppt、10ppt、20ppt、30ppt、40ppt)的条件对达氏鳇进行处理,以温度16℃盐度0ppt作为对照,做组织表达差异分析,同时取肌肉、鳃丝和肝脏作为样品做荧光定量分析。试验结果得出,达氏鳇HSP70基因(Genbank登录号:KP050541)序列全长为2275bp,包括5′非编码区85个核苷酸,3′非编码区237个核苷酸和开放阅读框(ORF)1953个核苷酸。通过分析氨基酸序列发现,达氏鳇HSP70基因编码氨基酸650个,分子量71.13KD,理论等电点5.215,含有HSP70家族的3个标签序列,分别位于氨基酸序列的9-16(IDLGTTYS),197-210(IFDLGGGTFDVSIL)和334-348(IVLVGGSTRIPKIQK)上。达氏鳇HSP90基因(Genbank登录号:KP050542)序列全长2718bp,包括5′非编码区44bp,3′非编码区497bp和开放阅读框(ORF)2178bp。通过分析氨基酸序列发现,达氏鳇HSP90编码725个氨基酸,分子量83.62KD,其理论等电点4.846。该蛋白含有HSP90家族的1个标签序列,位于氨基酸序列的32-41(YSNKEIFLRE)上。达氏鳇热休克蛋白组织表达分析显示,HSP70和HSP90在达氏鳇的11种组织中都有表达,包括肌肉、鳃丝、脑、须、心脏、肝脏、脾脏、胃、肠道、

本文编号：2724280