IHNV-N蛋白和IPNV-VP2蛋白抗血清的制备与应用

发布时间：2020-06-22 23:51

【摘要】：传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)和传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)分别是传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病的病原。这两种病毒主要感染鲑、鳟鱼类,引发相应临床疾病并导致鱼类极高的死亡率,给鲑、鳟鱼水产养殖业带来了巨大的经济损失。尽管针对IHNV和IPNV的疫苗已在许多国家商业化,但在现代水产养殖中,IHNV和IPNV的流行仍然很普遍。本研究通过RT-PCR方法克隆了IHNV-N基因,构建了pTriEx-N重组表达载体。将重组表达载体pTriEx-N与杆状病毒线性化的Bacmid DNA共转染Sf9细胞收获重组病毒,然后利用杆状病毒表达载体系统表达并分离纯化了IHNV-N目的蛋白。同时我们通过重叠PCR的方法从头合成了IPNV-VP2基因,构建了pTriEx-VP2重组表达载体,然后经过大肠杆菌原核表达系统表达并分离纯化得到所需的IPNV-VP2目的蛋白。我们将纯化的IHNV-N蛋白和IPNV-VP2蛋白分别注射免疫家兔,制备了抗血清。血清效价检测结果显示,IHNV-N蛋白抗血清稀释度达到1/1000时,其OD_(450)值仍大于阴性血清数值的2.1倍以上,可认定为阳性;而IPNV-VP2蛋白抗血清稀释度达到1/2000时,其OD_(450)值仍大于阴性血清数值的2.1倍以上,可认定为阳性。两种抗血清之间无交叉性反应,表明特异性良好。组织样品检测结果显示,制备的IHNV-N抗血清可以用于IHNV感染虹鳟的快速检测。本研究制备的高效价的抗血清为IHN及IPN病毒感染提供了免疫学检测试剂,同时为鲑、鳟鱼病毒疫情的监测及有效防控奠定了基础。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S941.414

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