tssJ基因对溶藻弧菌运动性和生物膜形成的影响

发布时间：2020-07-03 07:05

【摘要】：溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种世界性分布的海洋细菌,对海洋动物和人类均存在明显的致病,溶藻弧菌的致病机制受到了国内外学者的广泛关注。TssJ基因是编码溶藻弧菌Ⅵ型分泌系统的脂蛋白,成熟的TssJ蛋白通过N-半胱氨酸的酰化镶嵌在细胞外膜上,并且突出到细胞周质中,可显著影响肠聚集性大肠杆菌的毒力,但迄今尚未见关于溶藻弧菌的TssJ功能的相关研究报道。本文针对tssJ基因对溶藻弧菌HN08155运动性和生物膜形成的影响进行研究。 本实验室采用基因敲除的方法成功构建了溶藻弧菌HN08155基因缺失突变株△tssJ并确定其毒力存在减弱现象的基础上,本研究首先选用pACYC184作为回补质粒,对突变株△tssJ进行回补实验构建回补株tssJ+。结果表明,由于质粒△tssJ被突变株△tssJ插入一个大于自身质粒2-3倍的基因组,使回补质粒无法再回补菌株中正常转录和翻译；将pMMB206和pJN105质粒导入突变株△tssJ,两种质粒同样被溶藻弧菌改造,无法在细菌中正常转录表达。因此,溶藻弧菌NH08155存在较强的基因保护机制,当前常见的回补方法无法实现外源基因在该菌株中的正常表达。 本研究进一步测定了tssJ基因对溶藻弧菌HN08155运动性和生物膜形成的影响。其中,鞭毛染色和泳动性试验结果表明,突变株△tssJ无法合成鞭毛,运动能力明显减弱,tssJ基因对溶藻弧菌HN08155的运动性存在正调控作用。通过扫描电镜和激光共聚焦显微镜的观察,野生株和突变株的生物膜都是由微菌落和多糖等胞外产物组成的。通过对两株菌所形成的生物膜和胞外多糖检测,野生株的成膜能力和所分泌得水溶性胞外多糖能力远高于突变株,但突变株生物膜中的水不溶性胞外多糖含量远高于野生株,也就是说,tssJ基因对溶藻弧菌HN08155的成膜能力具有正调控作用,并且改变该菌株成膜过程中合成胞外多糖的类型。同时,本研究还测定了在不同物质的浓度下,野生株和突变株成膜能力的差异,结果表明,tssJ基因在溶藻弧菌形成生物的阶段,对KCl的诱导呈负调控作用,对NaCl和CaCl2的诱导基本不存在调控;对MgCl2和NaNO3的诱导没有明显的调控规律。 总之,本研究确定了tssJ基因对溶藻弧菌的运动行和生物膜形成都具有促进作用,为今后系统揭示溶藻弧菌的致病机理和免疫奠定重要基础。
【学位授予单位】：海南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S941.4

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本文编号：2739356