IHNV糖蛋白的截短表达及免疫原性检测
发布时间：2020-07-13 03:19
【摘要】：鱼传染性造血器官坏死病(Infectious Haematopoietic Necrosis offish,IHN)是由传染性造血器官坏死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus,IHNV)引起的一种鲑科鱼类的常见急性病毒性传染病,常造成鱼苗或幼鱼高达50%-100%的死亡率。IHNV囊膜表面有一个糖蛋白(Glycoprotein,G)突起。G蛋白在参与细胞受体与病毒的识别和结合等过程中起着非常重要的作用,并且与病毒的毒力相关。此外,G蛋白还是病毒的主要抗原,存在保护性抗原决定簇,能够诱导机体产生特异性中和抗体。因此,G蛋白及其抗体的制备在IHNV诊断试剂的开发、G蛋白功能的研究及基因工程疫苗的研制中具有重要的作用。我国现行IHNV毒株与欧美等国家的IHNV流行毒株基因型均有所不同,有可能会导致G蛋白免疫原性改变。因此,针对我国IHNV毒株的免疫学检测方法的建立极为必要。而目前,以全长G蛋白为抗原制备的多抗与病毒性出血性败血症病毒(Viralhaemorrhagic septicemia virus,VHSV)存在交叉反应。针对上述问题,本研究在生物信息学分析的基础上,对我国现行IHNV毒株G蛋白进行截短表达和抗血清的制备,旨在建立我国现行IHNV的免疫学检测方法。为了深入研究G蛋白的免疫原性,本文通过相关软件分析了 G蛋白的跨膜区、抗原性和疏水性后,将G蛋白截短表达。聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,PAGE)的结果显示,经过截短后的糖蛋白Gs大小为40kDa,将截短后的糖蛋白进行纯化,用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测其纯度达到90%。使用纯化后的糖蛋白Gs制备兔抗血清,酶联免疫吸附实验法(ELISA)间接免疫荧光结果分析,制备的兔抗血清与IHNV-Sn分离株及参考毒株的反应均呈荧光红色,说明兔抗血清与IHNV能发生特异性的反应。以上实验结果证明表达的Gs蛋白与病毒表面的糖蛋白具有相近的免疫原性,这一结论可以作为重要的实验依据,为建立间接免疫荧光法检测传染性造血器官坏死病和研发截短G基因的DNA疫苗提供帮助。
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S941.41
【图文】：
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本文编号：2752882
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S941.41
【图文】：
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本文编号：2752882
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