嗜水气单胞菌诱导鲫皮肤和鳃免疫相关基因差异表达研究

发布时间：2020-07-22 07:39

【摘要】：鱼类皮肤和鳃黏膜免疫系统在抵抗病原微生物感染过程中发挥重要作用。本研究以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)浸泡感染鲫鱼(Carassius auratus)为实验动物模型,通过Illumina Hiseq2000高通量测序结合实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,对诱导前后鲫皮肤和鳃转录组测序分析。结果表明,鲫皮肤转录组获得13290171480 nt个读序,共组装Unigene118111个基因,平均长度958nt,其中有94776个基因注释;鲫鳃获得9776335500 nt个读序,共组装Unigene104213个基因,平均长度928 nt,其中有84259个基因注释。基于GO、KEGG数据库分析等发现主要有抗原加工和呈递、吞噬小体、细胞粘附分子、趋化因子、细胞周期、补体和凝血系统、NK细胞介导细胞毒作用、细胞凋亡、TLR、NF-κB、BCR、TCR、NLR、JAK-STAT、MAPK、TGF-β、p53、Wnt、VEGF、Notch和mTOR等信号通路参与皮肤和鳃黏膜免疫应答过程。根据嗜水气单胞菌诱导鲫皮肤和鳃差异表达基因(DEGs),筛选获得11个皮肤、12个鳃免疫相关基因并设计特异性引物,以鲫β-Actin为内参基因,采用qRT-PCR方法对皮肤和鳃转录组测序结果进行基因表达水平验证分析。结果表明,鲫皮肤免疫相关基因包括C反应蛋白(CRP-2)、主要组织相容性复合体Ι(MHC-Ι)、主要组织相容性复合体II(MHC-II)、补体(C7)基因差异表达高于5倍以上,并且MHC-Ι、CRP-2、核转录因子抑制蛋白(IkBα)、肿瘤坏死因子(TNFβ)、S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF6)等基因表达水平在嗜水气单胞菌感染6h上调表达显著;MHC-II、C7、白细胞介素(IL-22)、干扰素诱导GTP结合蛋白(Mx1)基因在感染12h差异表达倍数较高,结果显示qRT-PCR检测结果与鲫皮肤转录组测序分析基本一致。对嗜水气单胞菌诱导鲫鳃免疫相关基因进行基因表达水平验证分析,其中发现MHC-I基因、白细胞介素(IL-17C)基因差异表达高于5倍以上,结果显示与鳃转录组测序分析结果基本一致,并且qRT-PCR值偏高。本研究首次对嗜水气单胞菌感染诱导鲫皮肤和鳃免疫应答转录组学分析,有助于了解鱼类皮肤和鳃黏膜免疫系统的分子机制。
【学位授予单位】：江苏师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【图文】：

技术路线图

嗜水气单胞菌Zf1感染鲫鱼皮肤和鳃的总RNA电泳图

皮肤Unigene的长度分布统计

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 罗辉;叶华;肖世俊;郑曙明;王晓清;王志勇;;转录组学技术在水产动物研究中的运用[J];水产学报;2015年04期

2 宋长太;陈诚;戴翠娥;;病害肆虐导致盐城地区鲫鱼养殖遭重创[J];渔业致富指南;2014年24期

3 李雪;胡秀彩;兰云;沈晓静;朱爱华;吕爱军;;嗜水气单胞菌粘附素和外膜蛋白A基因克隆与结构预测[J];基因组学与应用生物学;2014年01期

4 邢根娣;胡秀彩;李雪;周洁;孟思妍;朱爱华;吕爱军;;鲫鱼肠道温和气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J];江苏师范大学学报(自然科学版);2013年04期

5 王艺;李槿年;兰云;胡秀彩;沈晓静;李雪;吕爱军;;鲫鱼鳃中迟钝爱德华氏菌的分离与鉴定[J];江苏农业科学;2013年05期

6 王少敏;叶孟;倪曙民;;BCL-3的研究进展[J];生命科学;2009年01期

7 苏建国;朱作言;汪亚平;;草鱼呼肠孤病毒上调稀有泩鲫鳃中TLR3和Mx基因的表达(英文)[J];水生生物学报;2008年05期

8 苑金香;李衍森;冯道俊;;热休克蛋白及其在生殖中的作用[J];潍坊学院学报;2006年06期

9 唐海蓉;陈仕均;王选年;;鱼类免疫组织的研究进展[J];现代畜牧兽医;2006年09期

10 赫崇波;王强;刘卫东;周遵春;徐晓虹;;鱼类趋化因子基因的研究[J];水产科学;2006年07期

本文编号：2765512