低氧对团头鲂细胞凋亡及抗氧化酶活性的影响

发布时间：2020-07-22 10:10

【摘要】：团头鲂(Megalobrama amblycephala)又称武昌鱼,是一种优良的淡水经济鱼类。近年来,随着自然环境的不断恶化以及人类活动的干预等使得其生存环境中时常出现低氧情形,制约了团头鲂养殖业的发展。本研究以团头鲂为研究对象,观察低氧处理后各个组织的结构变化,分析低氧和复氧处理对肝脏中抗氧化酶活性的影响,通过TUNEL及荧光定量PCR检测分析低氧对心肌细胞凋亡及抑凋亡基因bcl-2表达的影响。另外采用蔗糖梯度离心的方法提取心脏线粒体,并分析线粒体中MDA含量及SOD活性的变化。主要研究结果如下:1.低氧对团头鲂不同组织结构的影响低氧(DO:0.5 mg/L,严重低氧)处理团头鲂后取不同组织(心脏、肝脏、肾脏、肌肉、脾脏),通过组织切片染色观察后发现低氧对团头鲂心脏和肾脏影响较大,心肌纤维肿胀,排列出现紊乱,而肾脏出现局部血管破裂的现象。低氧对肌肉、肝脏、脾脏结构影响相对较小。电镜观察显示在中度低氧(DO:2.5±0.5 mg/L处理2 h,4 h)条件下,心脏线粒体的结构遭到不同程度的破环,线粒体肿胀,结构紊乱。严重低氧时,部分线粒体会发生破裂。2.低氧引起心脏细胞凋亡为了进一步研究低氧对心脏组织的影响,通过TUNEL(terminal dexynucleotidyl transferase Td T-mediated d UTP nick end labeling)及荧光定量PCR方法分析心脏组织的细胞凋亡、bcl-2的表达变化以衡量心肌细胞的凋亡情况。结果显示低氧会引起心脏细胞凋亡,并且随溶氧浓度的降低及低氧处理时间的延长凋亡指数逐渐增加。在中度低氧组(DO:2.5±0.5 mg/L)心脏中bcl-2的表达量也随着低氧处理时间的延长逐渐降低,而严重低氧组(DO:0.5 mg/L)中,其表达量显著增加。3.低氧对心脏线粒体SOD、MDA的影响基于蔗糖梯度离心法分离心脏线粒体,测定线粒体提取液蛋白浓度,然后检测心脏线粒体中SOD和MDA活性。结果显示在中度低氧处理组(DO:2.5 mg/L±0.5 mg/L)中,两者都随着低氧时间的延长而降低,而严重低氧组(DO:0.5 mg/L)中,两者的值又有所回升。4.低氧对肝脏抗氧指标的影响对不同低氧组团头鲂肝脏各种抗氧化酶指标的检测结果显示,低氧会导致肝脏中SOD和CAT酶活性、过氧化氢(H2O2)降低。肝脏中一氧化氮(NO)水平随溶氧浓度的降低及低氧处理时间的延长逐渐增加。肝脏总ROS水平随着低氧处理时间的延长逐渐降低,而复氧及严重低氧时ROS含量回升。
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S917.4
【图文】：

细胞凋亡,途径,线粒体

随后转运至线粒体中，进而激活线粒体凋亡途经（Li et al 1998），可以在这些细胞中外源性的死亡受体凋亡途径可以通过内源性的线粒体凋亡通路得到放大（蒋显 2014）。细胞凋亡的各种途径如图 1 所示（Jin 2005），从图也可以看出线粒体在细胞凋亡中具起到“主开关”的作用。

h 以上）；用于提取线粒体实验的样品（心脏）先用预冷的生理盐水快速洗净织表面残留的血液并快速放入液氮中然后于-80 ℃下是存；用于提取 RNA 的品（心脏）放入含 1 mLTrizol 的离心管中并于-80 ℃中是存备用。为了检测低氧对团头鲂肝脏组织中抗氧化酶的影响，本研究设计了另外实验组（实验鱼同上），分别为：溶氧浓度降低至 3.5±0.2 mg/L 组、溶氧浓一步降低至 1.0±0.2 mg/L 组、溶氧浓度恒定在 3.5±0.2 mg/L 处理 6 h 组、复氧（7.5±0.5mg mg/L）处理 24 h 组。低氧处理后每组随机取 5 尾，放入 MS-222 溶（150 mg/L）中麻醉后取肝脏组织，用于检测肝脏中 ROS、NO 和 H2O2的以及 CAT 和 SOD 的活性。对于水中溶氧量的检测和维持采用本实验室自行设计的低氧装置（如图来完成，其基本原理是在通过充氮气和空气来维持水中溶解氧在设定值，并通实时监控设施来检测溶氧和温度。

低氧处理,团头鲂,放大倍数,常氧

22图 3：低氧处理后团头鲂各个组织结构的变化Figure 3: The changes of the different tissue structure of M.amblycephala after hypoxiatreatment注：常氧（DO: 7.5±0.5 mg/L）和严重低氧（DO: 0.5 mg/L）条件下的心脏（A、）、肝脏（C、D）、肌肉（E、F）、脾脏（G、H）以及肾脏（I、J）组织切，A、B 放大倍数为：1000× 其它放大倍数：400×Note: Slides of heart （A, B），liver （C, D），muscle （E, F），spleen （G,） and kidney （I, J） under normoxia （DO: 7.5±0.5 mg/L）and severe hypoxiaDO: 0.5 mg/L）conditions, magnification of AB:1000× magnification of otherictures: 400×

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